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酶聯(lián)免疫試劑盒常見5種實驗檢測方法

發(fā)布時間：2024-07-23     發(fā)布作者：上海通蔚生物

  酶聯(lián)免疫試劑盒也叫“elisa試劑盒”，它是一種檢測生物樣本中抗原存在的技術。與其他類型的免疫測定一樣，ELISA檢測技術依靠抗體通過高度特異性的抗體-抗原相互作用來檢測目標抗原。ELISA主要有四種類型：直接ELISA、間接ELISA、夾心ELISA和競爭性ELISA。每種方法在酶聯(lián)免疫試劑盒都有其獨特的優(yōu)點、缺點和適用性。下面為大家詳細介紹。


  酶聯(lián)免疫試劑盒檢測類型


  直接ELISA法


  1971年，EvaEngvall和PeterPerlmann開發(fā)了一種革命性的免疫檢測方法，稱為酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）。ELISA利用抗體識別和結合特定抗原，從而檢測激素、病毒、細菌和其他生物分子的存在。直接ELISA是一種簡單的ELISA類型，它直接將抗原或抗體固定在固相載體上，并使用標記的抗體或抗原進行檢測。


  該方法能有效檢測較大的抗原，直接將抗體或抗原包被在酶標板上，用酶聯(lián)抗體或抗原進行檢測。孵育后，未結合的抗原或抗體都會被洗掉。加入底物以產(chǎn)生可見信號，通常是顏色變化。測量該信號的強度以確定存在的抗原或抗體的量。


優(yōu)點：
  • 由于僅使用一種抗體，因此過程更快，步驟更少。
  • 與使用二抗的方法相比，減少了交叉反應。
缺點：
  • 標記每個一抗既昂貴又費時。
  • 標記可能會影響抗體的有效性。有些抗體無法標記。實驗中標記一抗的靈活性有限，導致信號放大最小。


  間接ELISA：


  1978年，Lindstr?m,P等人在直接ELISA的啟發(fā)下，開發(fā)了間接ELISA技術，用于測量豬IgG。間接ELISA是臨床診斷的關鍵。它可以檢測血液中的抗體，顯示過去是否接觸過萊姆病、艾滋病毒和禽流感等疾病。


  在間接ELISA中，使用二抗代替一抗來檢測和分離抗原。在孵育過程中，如果血清中存在針對抗原的抗體，則會形成抗原抗體復合物。為了使這些復合物可視化，需要添加標記有與一抗特異性結合的酶的二抗。間接ELISA廣泛用于內(nèi)分泌學中以尋找抗原。


優(yōu)點：
  • 允許使用單個抗物種結合物測試針對特定抗原的多種抗血清。
  • 廣泛應用于診斷，尤其是篩查大量樣本。
  • 通過二抗增強信號放大。
缺點：
  • 可能與二抗發(fā)生交叉反應，從而產(chǎn)生非特異性信號。
  • 該過程中需要額外的孵化步驟。



  夾心ELISA：


  1977年，Kato,K等人上發(fā)表了關于夾心ELISA的研究。夾心ELISA可識別不同菌株的病原體，在病原體或抗原有限時很有用。


  微孔板孔被捕獲抗體包被并封閉以防止非特異性結合。然后加入含有抗原的樣品。將板孵育以使抗原能夠與捕獲抗體結合。孵育后，清洗可去除未結合的抗原，僅留下附著的特定抗原。添加并孵育針對結合抗原的特異性酶標記抗體，與捕獲抗體形成“三明治”。再進行一次清洗，去除未結合的酶標記抗體。添加底物，與酶發(fā)生反應，產(chǎn)生顏色變化。顯色表示陽性結果，表明酶活性和抗原存在。無色表示陰性結果，表示沒有抗原。目標抗原“夾在”兩種抗體之間，因此該方法得名“夾心ELISA”。這種方法比其他類型的ELISA靈敏度高2-5倍。


優(yōu)點：
  • 該方法可以快速準確地檢測樣本中的抗原濃度，無需先純化抗原。
  • 它對于在流行病期間識別微生物或病原體的菌株很有用，特別是在抗原水平較低或存在許多其他蛋白質(zhì)時。
缺點：
  • 它要求抗原至少具有兩個抗體結合位點，因為需要兩個抗體來形成夾層。
  • 該技術只能測量多價抗原，如蛋白質(zhì)或多糖。



  競爭ELISA


  Yorde,Donald等人1976年開發(fā)了這種方法。當測量的抗原很小并且只有一個抗體結合位點時，使用競爭性測定?？字型坑锌乖禺愋钥贵w或抗體特異性抗原。將樣本和酶標記的抗原或抗體加在一起。


  標記分子和未標記分子競爭結合到孔中。洗去未結合的分子后，加入酶底物，引起顏色變化。顏色強度與分析物濃度成反比：抗原或抗體濃度低時吸光度高，而濃度高時吸光度低。


優(yōu)點：
  • 主要的優(yōu)點是，一抗無需純化即可使用。
缺點：
  • 在競爭性 ELISA 中，隨著原始抗原濃度的增加，信號會變?nèi)酢?
  • 發(fā)生這種情況的原因是，樣本中的抗原水平越高，意味著留在孔中的標記抗原越少，從而導致信號越弱。


  多重ELISA


多重免疫測定法對于研究疾病變化非常有用，有助于監(jiān)測和改善治療。多重ELISA擴展了夾心ELISA，可在單個微量滴定板內(nèi)檢測抗原或樣本上的多個表位。這一進步類似于蛋白質(zhì)陣列格式，可在一個孔中同時檢測多種抗原。


優(yōu)點：
  • 它們可實現(xiàn)高通量分析，每個孔最多可進行 25 次分析。
  • 它們需要的樣本量較少。
  • 在時間和成本方面都很高效。
  • 它們允許對分子水平以及其他多個水平進行評估。
  • 它們能夠可靠地檢測多種濃度范圍內(nèi)的各種蛋白質(zhì)。
缺點：
  • 需要熟練的專業(yè)知識才能正確執(zhí)行。
  • 多重檢測可以檢測樣品或檢測溶液中多個抗體和抗原之間的相互作用。



上述為大家介紹ELISA試劑盒檢測類型，了解這些檢測方法，可以在實驗中結合優(yōu)缺點選擇適合自己實驗檢測方法提高實驗準確性。