牛血清知多少？一篇文章帶你全面了解

  牛血清是動(dòng)物血清一種，是細(xì)胞培養(yǎng)不可或缺的天然培養(yǎng)基。牛血清富含細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，通常含有一定比例的蛋白質(zhì)、糖類、礦物質(zhì)和維生素。牛血清按種類分為胎牛血清、新生牛血清、小牛血清。

  【胎牛血清】（FoetalBovineSerum，簡(jiǎn)稱FBS）：是采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血。胎牛血清中含有豐富的生長(zhǎng)因子、細(xì)胞黏附分子和其他細(xì)胞培養(yǎng)所需的成分，非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng)。

  這里值得注意的是由于其來(lái)源于胎兒，胎牛血清具有較高的胚胎抗原含量，因此在一些特定的細(xì)胞培養(yǎng)條件下需要小心使用。

  【新生牛血清】（NewbornCalfSerum，簡(jiǎn)稱NBCS）：0—7天內(nèi)（也有說(shuō)法是0—30天內(nèi)）;

  相比于小牛血清，新生牛血清中的生長(zhǎng)因子和抗體水平較低。它的優(yōu)勢(shì)在于它的穩(wěn)定性和較低的胚胎抗原含量，這使得它在一些特殊細(xì)胞類型的培養(yǎng)中更適用。

  【小牛血清】（CalfSerum）：采自出生30天至1年的小牛。它通常含有較高的成長(zhǎng)因子和抗體水平，可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)。小牛血清中的激素和免疫因子水平相對(duì)較低，這使得它在一些特定的細(xì)胞培養(yǎng)條件下更具優(yōu)勢(shì)。

  牛血清對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)用途

  胎牛血清用途：胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)常用的血清。適合多種細(xì)胞類型的培養(yǎng)，廣泛應(yīng)用常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞傳代和細(xì)胞研究領(lǐng)域。胎牛血清采自發(fā)育中的牛胚胎，營(yíng)養(yǎng)成分較為豐富，且此時(shí)的牛胚胎沒有完整的補(bǔ)體系統(tǒng)，因此胎牛血清無(wú)需熱滅活，內(nèi)毒素含量低，保證細(xì)胞健康！

  新生牛血清用途：新生牛血清的營(yíng)養(yǎng)成份略高于小牛血清，胚胎抗體水平較低，可用來(lái)培養(yǎng)肝細(xì)胞和骨髓細(xì)胞等細(xì)胞。

  小牛血清用途：小牛血清主要是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，提供激素和各種生長(zhǎng)因子、結(jié)合蛋白、促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用！適合哪些對(duì)激素、免疫因子要求較低的細(xì)胞。

  如何篩選牛血清？

  因胎牛血清使用較為廣泛，這里我們重點(diǎn)介紹一下對(duì)胎牛血清的篩選。胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的補(bǔ)充劑，其質(zhì)量對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。因此，在選擇胎牛血清時(shí)，需要進(jìn)行嚴(yán)格的篩選。

  1.pH值：首先，要確保胎牛血清的pH值在7.4至7.6的范圍內(nèi)，這與細(xì)胞生長(zhǎng)的最佳生理環(huán)境相一致。

  2.有效成分：接下來(lái)，需要檢查胎牛血清中細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、激素、粘附因子等有效成分的質(zhì)量水平。這些成分對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和存活起著關(guān)鍵作用。同時(shí)，還需要關(guān)注血清中免疫抑制因子的含量，因?yàn)檫^高的免疫抑制因子可能會(huì)抑制細(xì)胞的免疫反應(yīng)。

  3.內(nèi)毒素：內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的一種成分，它可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果造成負(fù)面影響。因此，選擇內(nèi)毒素含量低的胎牛血清至關(guān)重要。

  內(nèi)毒素含量越低，級(jí)別越高，以胎牛血清為例：

  血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時(shí)，此血清為特級(jí)胎牛血清；

  血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml，≤25EU/ml時(shí)，此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清；

  血清中內(nèi)毒素含量≥25EU/ml時(shí)，此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清；

  不同廠家，不同批次的血清，內(nèi)毒素?cái)?shù)值也可能有較大差異，因此很多血清廠家在名稱上已不注明級(jí)別。但使用者仍可通過檢測(cè)報(bào)告，自行甄別挑選

  4.細(xì)胞存活率：細(xì)胞存活率是衡量胎牛血清質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。高品質(zhì)的胎牛血清可以支持細(xì)胞的存活和增殖，使細(xì)胞在培養(yǎng)皿中生長(zhǎng)良好。

  5.其他指標(biāo)：除了上述指標(biāo)外，還需要關(guān)注胎牛血清的血清蛋白含量、補(bǔ)體活性、病毒污染等指標(biāo)。

  6.批次間差異：需要注意的是，即使同一品牌的不同批次胎牛血清之間也可能存在差異。因此，在選擇胎牛血清時(shí)，建議根據(jù)具體的細(xì)胞類型和研究目的選擇合適的批次。

  胎牛血清存儲(chǔ)條件

  胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的補(bǔ)充劑，其質(zhì)量對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。為了保持血清的活性，需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)拇鎯?chǔ)和使用。

  1.存儲(chǔ)：

  長(zhǎng)期儲(chǔ)存：胎牛血清應(yīng)在-20°C或更低溫度下凍存。

  短期儲(chǔ)存：如果需要短期儲(chǔ)存，可以將血清置于4°C冷藏，但應(yīng)在一周內(nèi)用完。如果您的實(shí)驗(yàn)用量較少，建議您選擇分裝的50ml規(guī)格，這可以有效地避免浪費(fèi)和保證血清的質(zhì)量。

  2.使用：

  解凍：解凍血清時(shí)，應(yīng)采用緩慢解凍的方式，例如置于4°C冰箱過夜，避免快速解凍導(dǎo)致血清成分發(fā)生變化。

  配制：血清和培養(yǎng)基的配制應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”原則，因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基成分發(fā)生變化，影響細(xì)胞培養(yǎng)效果。建議配好的培養(yǎng)液在3-5天內(nèi)用完。

  避免反復(fù)凍融：反復(fù)凍融會(huì)破壞血清中的活性成分，降低血清質(zhì)量，因此應(yīng)盡量避免。

  避免在4°C或更高溫度儲(chǔ)存過久：長(zhǎng)時(shí)間在4°C或更高溫度下儲(chǔ)存會(huì)加速血清的降解和污染，影響血清品質(zhì)。

  3.其他注意事項(xiàng)：

  在進(jìn)行血清操作時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，并定期檢查血清是否有污染跡象。

  胎牛血清融化注意事項(xiàng)及說(shuō)明

  在水浴過程中，血清瓶的平面要完全浸在水中，并緩慢搖動(dòng)瓶身，使血清均勻解凍，但搖動(dòng)中盡量不要產(chǎn)生泡沫。血清從-20℃取出后，應(yīng)先置于4°C冰箱過夜，第二天再進(jìn)行水浴解凍。

  解凍后的血清，根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求，按推薦體積加入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，充分混勻，制備成新鮮完全培養(yǎng)基（整個(gè)操作需在無(wú)菌超凈臺(tái)中進(jìn)行，注意無(wú)菌操作）。配制好的完全培養(yǎng)基應(yīng)在4℃冷藏保存，建議在3-5天內(nèi)用完。

  以下是一些補(bǔ)充說(shuō)明：

  在進(jìn)行血清操作時(shí)，應(yīng)佩戴手套，避免污染血清。

  配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)先將基礎(chǔ)培養(yǎng)基加熱至室溫，再加入血清，并充分混勻。

  胎牛血清需要熱滅火嗎？

  熱滅活是指將血清加熱至56℃，30分鐘，以滅活血清中的補(bǔ)體。補(bǔ)體是一種在免疫反應(yīng)中起重要作用的蛋白質(zhì)，它可能對(duì)某些細(xì)胞類型有毒性或抑制其生長(zhǎng)。在胎牛血清中，由于胎齡原因，尚未形成完整的補(bǔ)體系統(tǒng)，因此，胎牛血清不會(huì)真正干預(yù)免疫試驗(yàn)。故不需滅活。

  哪些情況對(duì)血清內(nèi)毒素應(yīng)格外留意篩選？

  在以下情況下，對(duì)血清內(nèi)毒素應(yīng)格外留意篩選：

  1.干細(xì)胞：干細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素非常敏感，內(nèi)毒素會(huì)導(dǎo)致干細(xì)胞死亡或功能異常。選擇內(nèi)毒素含量≤1EU/ml的優(yōu)質(zhì)血清對(duì)干細(xì)胞培養(yǎng)至關(guān)重要。

  2.免疫細(xì)胞：過高的內(nèi)毒素會(huì)誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子，影響免疫反應(yīng)，例如抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成。因此，選擇內(nèi)毒素含量低的優(yōu)質(zhì)血清可以減少內(nèi)毒素對(duì)免疫細(xì)胞的影響。

  3.基因敲除相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：由于基因敲除實(shí)驗(yàn)需要保持細(xì)胞的原始狀態(tài)，任何引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡的試劑都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，在準(zhǔn)備血清和其他試劑時(shí)，盡可能選擇內(nèi)毒素含量≤1EU/ml的血清，對(duì)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。

  4.原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細(xì)胞轉(zhuǎn)染：這些實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞的健康和活力要求較高，選擇內(nèi)毒素含量低的優(yōu)質(zhì)血清可以提高實(shí)驗(yàn)成功率。

  5.難養(yǎng)細(xì)胞：難養(yǎng)細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)條件要求較高，選擇內(nèi)毒素含量低的優(yōu)質(zhì)血清可以為細(xì)胞提供更好的生長(zhǎng)環(huán)境，提高細(xì)胞存活率。

  6.長(zhǎng)期培養(yǎng)、長(zhǎng)期凍存、經(jīng)常復(fù)蘇：這些情況下，血清會(huì)經(jīng)?；蜷L(zhǎng)時(shí)間作用于細(xì)胞。為保證細(xì)胞的健康，應(yīng)選擇內(nèi)毒素含量低的優(yōu)質(zhì)血清，以避免內(nèi)毒素長(zhǎng)期累積對(duì)細(xì)胞的毒性影響。

  上述對(duì)牛血清的介紹，牛血清作為細(xì)胞培養(yǎng)的天然培養(yǎng)基，正確的選擇對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)非常關(guān)鍵。希望上述內(nèi)容對(duì)您有所幫助！如果對(duì)牛血清還有疑問，歡迎在線咨詢通蔚顧問。通蔚也為科研提供優(yōu)級(jí)和特級(jí)胎牛血清用于細(xì)胞培養(yǎng)，歡迎前來(lái)了解！