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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
產(chǎn)品名稱 ：人陰道平滑肌細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：陰道組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介
人陰道平滑肌細(xì)胞分離自陰道組織。陰道位于膀胱、尿道和直腸之間，是一個(gè)富有彈性的管狀器官。它在人類生殖過程中具有多種生理功能，是連接子宮與外陰的通道，是排出月經(jīng)血、娩出嬰兒的必經(jīng)之路，也是一個(gè)重要的性交器官。陰道壁按組織學(xué)由外到內(nèi)分三層，即黏膜層、肌層和外膜。平滑肌，是非橫紋肌的肌肉組織。分布在人體動(dòng)脈和靜脈血管壁、膀胱、子宮、男性和女性生殖道、消化道、呼吸道、眼睛的睫狀肌和虹膜。
陰道平滑肌分離自陰道壁肌層組織，平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中。2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏。細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀。密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。
方法簡(jiǎn)介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的人陰道平滑肌細(xì)胞采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的人陰道平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SM A 免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、EG F、bFG F、Insulin、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 ：貼壁
細(xì)胞形態(tài) ：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 ：可傳3-5代左右
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相：空氣，95% 。C O2，5%
人陰道平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
人陰道平滑肌細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳3-5代左右。建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1）吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2）添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3）用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至
5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4）待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 復(fù)蘇操作說明
1. 準(zhǔn)備好37度水浴鍋，預(yù)熱至37度。
2. 準(zhǔn)備好T25培養(yǎng)瓶，加入10ml完全培養(yǎng)基（培養(yǎng)基量必須大于凍存液10倍體積）。
3. 取出干冰內(nèi)凍存細(xì)胞管，用EP手套包裹凍存管（防止管內(nèi)進(jìn)水導(dǎo)致污染），迅速放于水
浴鍋內(nèi)，于1min內(nèi)融化完全。
4. 取出凍存管，酒精噴灑消毒后擦干，置于超凈臺(tái)內(nèi)。
5. 吸取凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液，加入步驟2中準(zhǔn)備好的T25培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，8字緩慢搖勻。
6. 培養(yǎng)瓶放于37度C O 2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，靜置培養(yǎng)24h，更換新鮮換培養(yǎng)基（注意貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞不同換液操作方法）。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/m l），明膠（0. 1% ），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
