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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ：小鼠脊髓神經(jīng)元細胞
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：脊髓組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
小鼠脊髓神經(jīng)元細胞分離自脊髓組織。脊髓是細細的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu)，位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護。是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。
中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。人和脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在椎管里面，上端連接延髓，兩旁發(fā)出成對的神經(jīng)，分布到四肢、體壁和內(nèi)臟。
脊髓的內(nèi)部有一個H 形(蝴蝶型) 灰質(zhì)區(qū)，主要由神經(jīng)細胞構(gòu)成。在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū)，主要由有髓神經(jīng)纖維組成。脊髓是許多簡單反射的中樞。
脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng)) 分布到全身皮膚、肌肉和內(nèi)臟器官。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路，也是許多簡單反射活動的低級中樞。
按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié)，31對脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的。神經(jīng)系統(tǒng)最基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是神經(jīng)元，即神經(jīng)細胞，其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。
胞體又叫核周體，內(nèi)含神經(jīng)絲、微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經(jīng)元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示，在光鏡下是灰藍色斑塊狀，稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經(jīng)元的突起，能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動，突起的大小和形態(tài)各不相同，很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。
脊髓組織內(nèi)含有大量膠質(zhì)細胞，神經(jīng)元含量少，分離純化難度大，且脊髓神經(jīng)元細胞是高度分化的終末細胞，不能分裂增殖，培養(yǎng)要求高。
剛接種的脊髓神經(jīng)元呈圓形，體積小，透亮，無突起。培養(yǎng)2-3d，可見胞體增大，突起增多延長。培養(yǎng)6-7d，細胞體大飽滿，突起明顯增加延長并交織成網(wǎng)，光暈明顯，立體感強。培養(yǎng)20d后，死亡細胞明顯增加，細胞出現(xiàn)內(nèi)空泡，突起粗細不均，甚至脫壁，發(fā)生細胞崩解。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的小鼠脊髓神經(jīng)元細胞采用膠原酶-胰酶聯(lián)合消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的小鼠脊髓神經(jīng)元細胞經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：PLL(0. 1m g/ml)
培 養(yǎng) 基 ：含B-27 Supplem ent、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態(tài) ：神經(jīng)元細胞樣
傳代特性 ：屬于終末分化細胞。屬于不增殖細胞群
傳代比例 ：不傳代
消 化 液 ：0. 125% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
小鼠脊髓神經(jīng)元細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
小鼠脊髓神經(jīng)元細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈神經(jīng)元細胞樣，在通蔚生物技術(shù)部標準操作流程下，細胞屬于終末分化細胞。屬于不增殖細胞群。建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 靜置后，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)，拍照記錄細胞的貼壁情況，漂浮的細胞需離心收集后在離心管消化(脫落細胞處理方式) ，貼壁細胞也需消化后與脫落的細胞合并一起后重新接種。
3. 神經(jīng)元細胞消化
1) 將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心收集細胞(1200rpm5min) ，細胞沉淀按照下面脫落細胞處理方式處理該部分細胞。
2) 培養(yǎng)瓶內(nèi)貼壁細胞，用PBS(37℃預(yù)熱) 清洗細胞一次，將PBS收集到步驟1的離心管中，不要直接丟棄。
3) 添加0. 125% 胰蛋白酶消化液(0. 25% 胰酶用PBS稀釋一倍) 1m L至培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，放入4℃冰箱消化細胞3-5min(或者37℃溫浴1min ) 。
4) 倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化(稀釋法終止消化，培養(yǎng)基用量不低于5ml) 。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，1200rpm 5min 離心去除殘留胰酶。
6) 去掉上清，加入適量的完全培養(yǎng)基混勻(可補加1% FB S，促進貼壁) ，接種于孔板中(提前多聚賴氨酸包被孔板) 。
7) 待細胞貼壁后可用于后續(xù)相關(guān)實驗。
4. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1200rpm 5min離心，保留沉淀。
2) 添加0. 125% 胰蛋白酶消化液(0. 25% 胰酶用PBS稀釋一倍) 1m L至離心管中，輕柔重懸沉淀，放置4℃冰箱靜置3-5min ) 。
3) 消化完向離心管內(nèi)加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
4) 經(jīng)1200rpm ，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養(yǎng)基(可補加1% FBS，促進貼壁) 重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
5) 接種后絕對靜置24-48小時， 48小時后觀察，否則細胞容易聚團。
5. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ （2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/ml），明膠（0. 1% ），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
特殊注意事項
5. 神經(jīng)元細胞貼壁不牢，必須包被培養(yǎng)器皿。細胞遇冷易收縮脫落，所用試劑需37℃預(yù)熱，室溫觀察時間不宜過長。
