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幫助> 科研產(chǎn)品 > 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 > 細(xì)胞系專用培養(yǎng)基 > 人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 ; MDA-MB-134-VI
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到貨處理
1、收到細(xì)胞后，首先觀察泡沫箱中干冰是否有剩余，凍存管是否完好，是否有解凍情況，若發(fā)現(xiàn)干冰完全汽化或凍存管有解凍現(xiàn)象，請(qǐng)及時(shí)拍照并與我們聯(lián)系。如果細(xì)胞簽收三天內(nèi) 未與我們聯(lián)系，則默認(rèn)為收貨良好。
2、復(fù)蘇第一管如有活性、狀態(tài)問(wèn)題及時(shí)與我們聯(lián)系，會(huì)有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再?gòu)?fù)蘇第二管。
特別說(shuō)明：未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問(wèn)題不予售后。
細(xì)胞復(fù)蘇
1、從液氮灌或-80℃冰箱中查找到需要復(fù)蘇的細(xì)胞，水浴鍋提前打開(kāi)預(yù)熱 37℃。
2、將查找到的凍存細(xì)胞在 37℃水浴中迅速搖晃解凍；
3、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的離心管中，1000rpm 離心 5min；
4、棄去上清液，補(bǔ)加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻，接種于 T25 培養(yǎng)瓶中（或 6cm 皿中）。
5、培養(yǎng)過(guò)夜，第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞傳代
1、如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
2、貼壁細(xì)胞用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次；
3、加 1-2mL 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加5mL 以上含 10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化；
4、輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在 1000RPM 條件下離心 5-8min，棄去上清液；
5、將懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞收集到的細(xì)胞沉淀，加 1-2mL 完全培養(yǎng)基吹打混勻；
6、按 5-6mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 5-6 mL 培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中。
（即 1 個(gè) T25 傳代接種至 2~3 個(gè) T25 或者 2~3 個(gè)直徑為 6cm 的培養(yǎng)皿）
細(xì)胞凍存
細(xì)胞收集參照傳代步驟 1~2；按凍存數(shù)量加入無(wú)血清凍存液后直接放-80℃冰箱過(guò)夜，后續(xù)可轉(zhuǎn)入液氮罐中長(zhǎng)期保存。
細(xì)胞收貨后處理
1、收到細(xì)胞后，首先觀察培養(yǎng)瓶是否完好，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)基外溢、渾濁等現(xiàn)象，請(qǐng)及時(shí)拍照并與我們聯(lián)系。
2、用 75%酒精對(duì)培養(yǎng)瓶表面進(jìn)行消毒處理，將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng) 2~4 h，以恢復(fù)細(xì)胞狀態(tài)。
3、靜置完成后，取出培養(yǎng)瓶，顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）前三天照片為重要售后依據(jù)。如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞異常請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系，如果細(xì)胞簽收三天內(nèi)未與我們聯(lián)系，則默認(rèn)為收貨良好。
4、若細(xì)胞密度超過(guò) 80%，則可以根據(jù)提供的細(xì)胞培養(yǎng)步驟進(jìn)行傳代或凍存；若細(xì)胞密度未達(dá) 到80%，收集懸浮細(xì)胞，加入 5mL 完全培養(yǎng)基到原瓶中，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞予重發(fā)
1.細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。
2.收到細(xì)胞未開(kāi)封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。
3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問(wèn)題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。
4.常溫發(fā)貨細(xì)胞靜置2小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。
5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時(shí)且未開(kāi)封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。
6.細(xì)胞活性問(wèn)題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。
細(xì)胞不予重發(fā)
1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)。
2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。
3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。
4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。
5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題的，不重發(fā)。
6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問(wèn)題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的，不重發(fā)。
