【通蔚生物】：直鏈淀粉含量試劑盒測定原理

通蔚生物直鏈淀粉含量試劑盒測定原理介紹如下：

注 意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：直鏈淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷鍵連接的多糖鏈，其含量測定對于評價食品營養(yǎng)價值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。測定原理：利用 80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開，直鏈淀粉與碘形成的絡(luò)合物在 620nm 下有吸收峰。
需自備的儀器和用品：酶標(biāo)儀/可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研缽、冰、乙醚和蒸餾水。
試劑的組成和配制：試劑一：液體 100mL×1 瓶；4℃保存；試劑二：乙醚 100mL×1 瓶；(自備)試劑三：液體 100mL×1 瓶；4℃保存；試劑四：液體 2mL×1 瓶；4℃保存；試劑五：液體 300uL×1 瓶；4℃保存；淀粉提取：稱取 0.01~0.02g 烘干樣本（建議稱取約 0.01g）于研缽中研碎，加入 1mL 試劑一，充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min，3000g，25℃離心 5min，棄上清，留沉淀，加入 1mL 試劑二（乙醚）振蕩5min，3000g，25℃離心 5min，棄上清，留沉淀，加入 1mL 試劑三充分溶解，90℃水浴 10min，冷卻后待測。
測定步驟：1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 620nm，蒸餾水調(diào)零。
測定管：在 96 孔板或微量石英比色皿中依次加入 20μL 樣本， 14μL 試劑四，120μL 蒸餾水，2μL 試劑五，44uL 蒸餾水，混勻，測定 620nm 處吸光值，記為 A 測定?？瞻坠埽涸?96 孔板或微量石英比色皿中依次加入 20μL 試劑三， 14μL 試劑四，120μL 蒸餾水，2μL 試劑五，44μL 蒸餾水，混勻，測定 620nm 處吸光值，記為 A 空白。
直鏈淀粉含量計算：a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y=1.755x+0.0062；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。1、按照蛋白濃度計算直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A 測定-A 空白-0.0062)×V1]÷1.755 ÷(V1×Cpr)=0.57×(A 測定-A 空白-0.0062)÷Cpr2、按樣本干重計算直鏈淀粉含量(mg/g 干重)= [(A 測定-A 空白-0.0062)×V1] ÷1.755÷(W×V1÷V2) =0.57×(A 測定-A 空白-0.0062) ÷WV1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，gb. 用 96 孔板測定的計算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y= 0.8775x+0.0062；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），
y 為吸光值。1、按照蛋白濃度計算直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A 測定-A 空白-0.0062)×V1]÷0.8775 ÷(V1×Cpr)=1.14×(A 測定-A 空白-0.0062) ÷Cpr2、按樣本干重計算直鏈淀粉含量(mg/g 干重)= [(A 測定-A 空白-0.0062)×V1] ÷0.8775/(W×V1÷V2) =1.14×(A 測定-A 空白-0.0062) ÷WV1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g最低檢測限為 1mg/g 干重或 10μg/mgprot。

上海通蔚生物一直致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供的直鏈淀粉含量試劑盒科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù)，滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生物科技實驗需求。