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雞腎小管上皮細胞
產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ： 雞腎小管上皮細胞
產(chǎn)品品牌 ： 通蔚生物
組織來源 ： 腎組織
產(chǎn)品規(guī)格 ： 5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
雞腎小管上皮細胞分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、碳酸氫鈉等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性維生素D3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。
腎臟的這些功能，保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進行。腎小管是機體腎臟器官上與腎小囊壁層相連的一條細長上皮性小管，具有重吸收(reabsorption)和排泌作用。腎小管按不同的形態(tài)結(jié)構(gòu)、分布位置和功能分成近端小管、髓袢和遠端小管三部分；近端小管可分為直部和曲部，曲部也稱為近曲小管，位于皮質(zhì)迷路內(nèi)，于腎小體附近高度蟠曲；遠端小管曲部也稱為遠曲小管，位于皮質(zhì)迷路內(nèi)。
腎小管上皮細胞是腎小管外面的一層細胞，腎小管上皮細胞的分離、培養(yǎng)是研究腎臟疾病的一項重要技術(shù)，目前該細胞分離方法有酶分離法、化學分離法篩網(wǎng)分離法、顯微解剖分離法、流式細胞儀分離法等。
腎小管上皮細胞主要功能：
① 腎小管上皮細胞重吸收原尿中幾乎全部的葡萄糖和氨基酸。
② 排泌非營養(yǎng)物質(zhì)進入終尿。
③ 細胞能分泌炎癥介質(zhì)如細胞因子和趨化因子，通過產(chǎn)生IL-8或直接趨化白細胞參與急性炎癥反應。
④ 移植腎炎癥和新月體腎炎中PTEpiC 表達IL-2R 和M H C-Ⅱ類抗原，這說明腎小管上皮細胞參與腎免疫損傷的發(fā)生。隨著對腎間質(zhì)纖維化機制研究的日漸加深，腎小管上皮細胞(R T E C s)在其中的作用日益被人們重視。
因此，提供良好的腎小管上皮細胞模型，在腎小管間質(zhì)疾病的發(fā)病機制和治療藥物篩選的研究中是非常重要的。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的雞腎小管上皮細胞采用篩網(wǎng)過濾、膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶 。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的雞腎小管上皮細胞經(jīng)C ytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ： 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm 2)
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細胞形態(tài) ： 成纖維細胞樣
傳代特性 ： 可傳1代
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% 。C O2，5%
雞腎小管上皮細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
雞腎小管上皮細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈上皮細胞樣，在通蔚生物技術(shù)部標準操作流程下，細胞可傳1代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1.取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2.貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。
2)添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4)待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3.細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1m g/m l），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
