【通蔚生物】ELISA試劑盒實驗誤差該如何避免

      我們平時在ELISA試劑盒實驗的時候總是會出現(xiàn)一些誤差，那么在ELISA試劑盒實驗前我們該如何避免這些誤區(qū)呢？在ELISA試劑盒實驗前我們又有哪些需要注意事項呢？
1、仔細閱讀說明書；
2、確定試劑盒在有效期內(nèi)；
3、按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）；
4、標本制備要規(guī)范，每份標本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者，注意低溫保存；
5、準備好所有實驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等；
6、根據(jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量；
7、按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑。
ELISA試劑盒試驗時，我們需要注意事項如下：
1.正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2.在ELISA試劑盒實驗中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括：
（1）固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
（2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的濃度需進行滴定：Elisa試劑盒即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。