ELISA檢測方法詳解：競爭法和阻斷法的區(qū)別

  ELISA全稱為酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay),是一種在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中常用的檢測技術(shù),廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、食品安全、環(huán)境監(jiān)測和藥物篩選等領(lǐng)域。在ELISA實(shí)驗(yàn)類型中又分為直接ELISA、間接ELISA和競爭ELISA等。除此之外，還有個(gè)阻斷ELISA法，很多人會把阻斷ELISA法區(qū)別競爭ELISA法，今天，上海通蔚帶大家來認(rèn)識下阻斷ELISA法和競爭ELISA法區(qū)別。

  ELISA基本原理

ELISA檢測是在96酶標(biāo)板上進(jìn)行，將待檢測樣品（抗原或抗體）固定在板上，然后通過特異性抗體與待測樣品結(jié)合，從而形成酶標(biāo)復(fù)合物。最終通過底物與酶作用，產(chǎn)生可測定的信號。

  競爭ELISA法

  競爭ELISA法關(guān)鍵在于待測樣本中的抗原和實(shí)驗(yàn)中添加的已知抗原會爭奪固相載體上固定抗體的結(jié)合位點(diǎn)。競爭ELISA法步驟如下：

  1.將一抗（未標(biāo)記）與樣品抗原一起孵育。

  2.然后將抗體-抗原復(fù)合物添加到預(yù)先涂有相同抗原的96孔板中。

  3.通過清洗板去除未結(jié)合的抗體。（樣品中的抗原越多，能夠與孔中的抗原結(jié)合的抗體就越少，因此存在“競爭”。）

  4.添加對一抗具有特異性并與酶結(jié)合的二抗。

  5.添加底物，剩余的酶引發(fā)顯色或熒光信號。

  6.對于競爭性ELISA，樣品抗原濃度越高，最終信號越弱。

  阻斷ELISA法

  阻斷ELISA法的關(guān)鍵在于通過樣品中的抗體阻斷已知量的標(biāo)記抗體與固定抗原的結(jié)合。阻斷ELISA法步驟如下：

  將已知的抗原被吸附在固相載體（如ELISA微孔板）上，形成一個(gè)固定的抗原層。

  加入樣品，如果樣品中含有與固相載體上抗原特異性結(jié)合的抗體，這些抗體將與固相載體上的抗原結(jié)合。

  隨后加入標(biāo)記了酶的二抗（通常是與抗原結(jié)合的抗體）。如果樣品中已有抗體占據(jù)了抗原的結(jié)合位點(diǎn)，標(biāo)記抗體將無法有效結(jié)合到固相載體上。

  顯色與信號檢測：通過顯色反應(yīng)測定酶的活性，信號輸出的強(qiáng)度與固相載體上結(jié)合的標(biāo)記抗體的量成正比。因此，樣品中特異性抗體的量越高，標(biāo)記抗體的結(jié)合就越少，信號輸出也越低。信號輸出的強(qiáng)度與樣品中特異性抗體的量成反比。

  主要區(qū)別

  用途

  阻斷ELISA法特別適用于檢測樣品中抗體的存在和濃度，尤其在樣品中可能存在干擾性物質(zhì)或多種抗體的情況下。

  競爭法ELISA通常用于檢測小分子物質(zhì)等，因?yàn)檫@些小分子物質(zhì)通常只有一個(gè)或有限的抗原位點(diǎn)。此外，也可用于檢測抗體。

原理：競爭法ELISA中，樣品中的抗原或抗體與固定在固相載體上的抗原或抗體競爭結(jié)合標(biāo)記了酶的抗體；而阻斷法ELISA中，樣品中的抗體會與固相載體上的抗原結(jié)合，從而阻斷標(biāo)記了酶的抗體的結(jié)合。

上述是通蔚生物為大家介紹競爭和阻斷ELISA法之間的區(qū)別，具體選擇哪種方法要根據(jù)實(shí)驗(yàn)要檢測樣本的需要。如果您對ELISA類型還有疑問，歡迎前來咨詢通蔚ELISA顧問。通蔚有擁有15年以上的酶聯(lián)免疫試劑盒生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，搭建了ELISA試劑盒開發(fā)和成熟抗原-抗體系統(tǒng)的良好平臺。