聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的原理及操作步驟

  生物技術(shù)發(fā)展至今，為如今的科研技術(shù)帶來了突破，比如我們常見的ELISA、PCR等試劑盒技術(shù)。今天，就PCR技術(shù)小蔚為各位嘮叨一下其原理和步驟。

  PCR又叫聚合酶反應(yīng)或簡稱PCR，它提供了一種復(fù)制更多DNA部分的方法。PCR這項技術(shù)不需要在細(xì)胞中發(fā)生，實(shí)驗過程中常用的有PCR試劑盒，可以利于試劑盒進(jìn)行實(shí)驗。寫到這里，你可能想知道PCR是如何工作的？為什么要復(fù)制更多DNA的某些特定部分？接下來鑒定回答一下這兩個問題。

  PCR工作原理

  我們想要復(fù)制DNA部分，我們需要了解一下PCR實(shí)驗組成，通常PCR組成包括DNA模版

  引物、DNA聚合酶。由于PCR使用是熱量，因此使用的DNA聚合酶通常是耐熱型DNA聚合酶。常用到的聚合酶是Taq聚合酶，一種耐熱的聚合酶。Taq DNA 聚合酶來源于 Thermus aquaticus，這是一種在 70°C 以上溫度下生長的極端嗜熱真桿菌。這意味著 Taq DNA 聚合酶在大約 72°C 溫度下發(fā)揮最佳酶活性。這種熱穩(wěn)定性使Taq聚合酶成為PCR的理想選擇。

PCR步驟  

  我們還需要DNA核苷酸來構(gòu)建DNA聚合酶，我們可以通過三個步驟來了解PCR構(gòu)成。我們這里將在用一個雙鏈DNA分子進(jìn)行說明，并假設(shè)這是我們需要復(fù)制的。

  變性。酶變性使用一種方法是使用熱量，此步驟涉及添加分離DNA分子兩條鏈所需的熱量。

  退火?，F(xiàn)在已經(jīng)被熱量分開的兩條DNA鏈將被量確并被引物鏈接起來，此步驟溫度應(yīng)允許引物與您想要擴(kuò)增（既復(fù)制）的特定DNA片斷結(jié)合。

  DNA合成。通過DNA合成，我們將制造更多DNA副本。為此，DNA聚合酶將開始在兩條鏈上工作，并將實(shí)驗DNA核苷酸作為其構(gòu)建材料來擴(kuò)增DNA。需要注意的是，這一步的溫度可能比上一步要高一些。適合所用特定DNA聚合酶的理想溫度。

  通過上述步驟，完成一個循環(huán)后，你就會得到兩個雙鏈DNA分子。上述PCR實(shí)驗步驟有點(diǎn)類似于細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的情況。你可以重復(fù)上述步驟，現(xiàn)在你有兩個雙鏈DNA分子，因此，你需要重復(fù)變性、退火和DNA合成步驟。你現(xiàn)在有四個雙鏈DNA分子，您再次重復(fù)步驟，你現(xiàn)在有八個，依次類推就可以復(fù)制多個。

  PCR應(yīng)用

  PCR使用非常廣泛，PCR被用于許多研究實(shí)驗室，并在法醫(yī)學(xué)，基因檢測和診斷方面也有實(shí)際應(yīng)用。例如，PCR用于從患者的DNA中（或在產(chǎn)前檢測的情況下從胎兒DNA中）擴(kuò)增與遺傳疾病相關(guān)的基因。 PCR還可用于測試患者體內(nèi)的細(xì)菌或DNA病毒：如果存在病原體，則可以從血液或組織樣品中擴(kuò)增其DNA區(qū)域。

  關(guān)于PCR就介紹這里，上海通蔚也有PCR試劑盒，專為科研實(shí)驗使用。如果您對PCR及試劑盒感興趣，也歡迎來電。