ELISA 實(shí)驗(yàn)必備：細(xì)說6種關(guān)鍵試劑的作用

  ELISA實(shí)驗(yàn)會(huì)用到哪些試劑？在ELISA中常用到的試劑包括包被液 、封閉液、洗滌緩沖液、樣品稀釋液 、酶標(biāo)抗體、底物和終止液。接下來，上海通蔚就elisa實(shí)驗(yàn)所需試劑詳細(xì)說明。

  在介紹試劑之前，我們先簡(jiǎn)單了解下elisa基本原理。elisa基本原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)，將待測(cè)樣品中的抗原或抗體與酶標(biāo)記的抗體或抗原結(jié)合，再通過洗滌和顯色等步驟，對(duì)待測(cè)樣品中的抗原或抗體進(jìn)行定量或定性分析。詳情ELISA檢測(cè)試劑盒，可以參考《ELISA檢測(cè)試劑盒：原理、步驟和操作指南》

  包被液。Elisa實(shí)驗(yàn)第一步就是包被，即將抗原或抗體固定在酶標(biāo)板上，以便后續(xù)的抗原抗體反應(yīng)。包被液用于將抗原或抗體吸附到酶標(biāo)板上，通常是碳酸鹽緩沖液或磷酸鹽緩沖液。包被液作用：

  1、提供合適的pH和離子強(qiáng)度環(huán)境:包被液通常是碳酸鹽緩沖液或磷酸鹽緩沖液，可以提供合適的pH和離子強(qiáng)度環(huán)境，促進(jìn)蛋白質(zhì)與聚苯乙烯表面的結(jié)合。

  2、提高蛋白吸附效率:一些包被液中可能含有額外的成分，例如蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑或表面活性劑，可以進(jìn)一步提高蛋白質(zhì)的吸附效率和穩(wěn)定性。

  封閉液。在包被之后，立即使用效果較好的封閉液（如細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)BSA、Tween等）封閉非特異性抗體。用于封閉酶標(biāo)板上未被抗原或抗體占據(jù)的位點(diǎn)，減少非特異性結(jié)合。

  洗滌緩沖液。用于洗去未結(jié)合的物質(zhì)，降低背景信號(hào)，讓您的信號(hào)更加清晰，通常是 PBS (磷酸鹽緩沖液) 或 Tris 緩沖液，可能含有 Tween-20 等去污劑。可以說在ELISA操作中，洗滌是最主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)引起操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌，不得馬虎。

  酶標(biāo)抗體。在elisa實(shí)驗(yàn)中，與目標(biāo)抗原或抗體特異性結(jié)合，并帶有酶標(biāo)記，例如辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AP)。

  底物。與酶標(biāo)抗體上的酶反應(yīng)，酶會(huì)催化底物發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)，例如顏色變化或發(fā)光。通過檢測(cè)信號(hào)的強(qiáng)度，我們可以定量樣品中的目標(biāo)蛋白（抗原或抗體）。

  終止液。用于終止酶-底物反應(yīng)，例如酸性溶液或 EDTA 溶液。終止液有兩方面作用：一是終止液破壞了HRP酶的活性，使酶的催化功能喪失，中止反應(yīng)，使得讀數(shù)相對(duì)穩(wěn)定，輕易控制；

  二是終止液使酶失活的同時(shí)，使得pH降低，顯色底物的特征吸收波長(zhǎng)發(fā)生變化，即可使藍(lán)色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，聯(lián)苯醌在波長(zhǎng)450nm處有最大消光系數(shù)。

  ELISA試劑盒保存方法

  ELISA是一種靈敏的檢測(cè)方法，用于檢測(cè)樣品中特定抗原或抗體的存在。為了保持ELISA試劑盒的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，正確的保存方法非常重要。以下是ELISA試劑盒保存方法的一些建議：

  1.避免反復(fù)凍融

  ELISA試劑盒中包含的酶標(biāo)板和試劑應(yīng)避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融會(huì)破壞酶的活性，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。因此，在儲(chǔ)存過程中，應(yīng)將ELISA試劑盒放在冰箱冷凍室中，使用時(shí)取出，并在室溫下融化。

  2.低溫保存

  ELISA試劑盒中的酶標(biāo)板和試劑應(yīng)在低溫下保存。通常建議將它們保存在2-8℃的冰箱中。低溫可以保持酶的活性和穩(wěn)定性，延長(zhǎng)試劑盒的保質(zhì)期。

  3.干燥保存

  ELISA試劑盒中的酶標(biāo)板和試劑應(yīng)避免潮濕。過高的濕度會(huì)導(dǎo)致酶標(biāo)板變形、變質(zhì)，影響檢測(cè)結(jié)果。因此，在儲(chǔ)存過程中，應(yīng)將ELISA試劑盒放在干燥、通風(fēng)的地方，避免直接暴露在空氣中。

  4.避免陽光直射

  ELISA試劑盒中的酶標(biāo)板和試劑應(yīng)避免陽光直射。陽光中的紫外線會(huì)破壞酶的活性，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。因此，在儲(chǔ)存過程中，應(yīng)將ELISA試劑盒放在避光的地方，如抽屜或柜子里。

  5.按說明書要求儲(chǔ)存

  不同廠家生產(chǎn)的ELISA試劑盒可能有不同因的此儲(chǔ)，存在要使求用。試劑盒前，應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，了解該試劑盒的儲(chǔ)存方法和注意事項(xiàng)。嚴(yán)格按照說明書的要求進(jìn)行儲(chǔ)存可以保證試劑盒的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。

  上述ELISA試劑實(shí)現(xiàn)了ELISA檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性。了解ELISA檢測(cè)試劑盒的組成部分及其作用有助于更好地理解和應(yīng)用該技術(shù)在科研領(lǐng)域的重要性。