什么是細胞培養(yǎng)？從基本概念到實踐步驟！

  對于實驗室搞科研的小伙伴第一次接觸細胞培養(yǎng)會緊張又興奮，害怕自己會出錯。今天，上海通蔚生物在這里為大家科普一下細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識，希望可以幫助您在科研之路少走些彎路。

  什么是細胞培養(yǎng)

  細胞培養(yǎng)（cell culture）是指從動物或植物中取出細胞，然后在人工環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等）中培養(yǎng)以進行科學研究。細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學正規(guī)的名詞叫細胞培養(yǎng)技術(shù)。細胞培養(yǎng)技術(shù)是直接從組織中取出并通過酶或機械方法進行解離，也可以來源于已建立的細胞系或細胞株。

  培養(yǎng)細胞類別哪些？

  細胞培按類別可分為動物細胞培養(yǎng)、植物細胞培養(yǎng)和微生物細胞培養(yǎng)三類，下面參考表格：

  請注意，這只是對細胞類別培養(yǎng)及其特點的一個簡化概述，具體的培養(yǎng)條件和應用領(lǐng)域可能因具體的細胞類型和實驗目的而有所不同。

  細胞培養(yǎng)要注意事項

  細胞培養(yǎng)要注意在無菌環(huán)境下、合適的溫度、適宜的滲透壓和氣體環(huán)境與PH等。

  1、無菌環(huán)境。在進行人工環(huán)境下首先要注意是無菌五毒，這樣可以保證細胞在人工環(huán)境下生長繁殖。

  2、合適的溫度。環(huán)境溫度是影響細胞生長的一個重要條件。細胞培養(yǎng)條件一般36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞正常代謝會收到影響，甚至死亡。

  3、合適的滲透壓。滲透壓，本質(zhì)是溶液中溶質(zhì)微粒對水的吸引。高滲溶液或低滲溶液會引起細胞發(fā)生褶皺、腫脹、破裂。在人工環(huán)境培養(yǎng)細胞理想的滲透壓為260～320mmol/L，一般來說適合大多數(shù)細胞。

  4、氣體環(huán)境和PH值。當細胞內(nèi)部的PH值偏離正常范圍時，它會導致構(gòu)象酶發(fā)生變化，從而會影響細胞內(nèi)部的酶活性，嚴重影響細胞的代謝和生長發(fā)育。大多數(shù)細胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳氣體比例為宜。

  細胞培養(yǎng)步驟

  細胞培養(yǎng)步驟分為細胞復蘇、細胞傳代和細胞凍存

  復蘇

  復蘇是從低溫保存狀態(tài)中將細胞喚醒并重新引入正常生長環(huán)境的過程。這通常涉及從液氮或-80℃冰箱中取出細胞凍存管，迅速將其放入37℃水浴中融化，然后轉(zhuǎn)移細胞至含有適當培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中。復蘇過程中需要確保細胞快速而均勻地受熱，以減少冰晶對細胞的潛在傷害。復蘇后的細胞需要被放置在培養(yǎng)箱中，在適當?shù)臏囟群蜐穸葪l件下培養(yǎng)，以便它們能夠重新適應并恢復生長。

  傳代

  傳代是當細胞在培養(yǎng)中增殖到一定密度時，將其分離并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基中以繼續(xù)生長的過程。這通常涉及使用胰蛋白酶或其他消化酶將細胞從培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶底部分離下來，然后將其重新懸浮在培養(yǎng)基中，并分配到新的培養(yǎng)容器中。傳代的目的是防止細胞因過度增殖而接觸抑制，從而保持細胞的活力和增殖能力。傳代過程中需要仔細操作，以避免對細胞造成過度機械應力或污染。

  凍存

  凍存是將細胞保存于低溫環(huán)境中，以便長期保存和后續(xù)使用的過程。這通常涉及使用含有細胞凍存液（如DMSO）的培養(yǎng)基，將細胞逐漸降溫至-80℃或更低，然后將其轉(zhuǎn)移到液氮中長期保存。凍存過程中需要嚴格控制降溫速率，以減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而保護細胞的完整性和活性。凍存的細胞可以在需要時復蘇并重新引入培養(yǎng)，以進行后續(xù)實驗。

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