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夾心 ELISA法優(yōu)點和步驟詳解

發(fā)布時間:2024-01-15     發(fā)布作者:上海通蔚生物

  ELISA 主要有四種類型:直接 ELISA、間接 ELISA、夾心 ELISA 和競爭 ELISA。每個都有獨特的優(yōu)點、缺點和適用性。今天,上海通蔚生物帶大家認識夾心ELISA試劑盒及步驟。詳細了解ELISA類型可以參考《ELISA 的類型》。

  夾心酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)是有效的實驗室程序,有助于檢測樣品中目標抗原的存在并測量其濃度。該測試用于計算兩層抗體(即捕獲抗體和檢測抗體)之間的抗原。在夾心 ELISA 中,兩種抗體在使用前必須配對并進行測試。此外,在進行夾心 ELISA 時,捕獲抗體和檢測抗體不得干擾彼此的結合能力。夾心 ELISA 的主要優(yōu)點之一是能夠特異性測量不純樣品中的抗原。三明治檢測的極其穩(wěn)健的性質使其成為醫(yī)療目的的絕佳診斷工具,特別是用于識別潛在的食物過敏原或測試某些藥物。

  什么是夾心ELISA


  如前所述,該測試可用于識別和量化未知樣品中的抗原濃度。由于該測試的過程使用至少兩種抗體,因此待測量的抗原還必須具有至少兩個能夠與抗體結合的非重疊表位(抗原決定簇)。在夾心 ELISA 中,單克隆和多克隆抗體用作檢測和捕獲抗體。單克隆抗體用作檢測抗體,因為它們有助于更準確的檢測和定量,而;多克隆抗體被用作捕獲抗體,因為它們有助于盡可能多地結合抗原。詳細了解單克隆和多克隆可以參考《蛋白質免疫測定:認識多克隆抗體和單克隆抗體


elisa


  夾心elisa優(yōu)點


  夾心ELISA檢測有哪些優(yōu)點?

  夾心 ELISA 測試涉及使用兩種抗體。因此,在夾心 ELISA 的幫助下,可以更特異性地捕獲和檢測抗原。

  夾心 ELISA 測試更適合復雜的樣品,因為抗原在測量前不需要純化。

  夾心 ELISA 比直接和間接 ELISA 測試的靈敏度高 2 至 5 倍。它還可以快速、準確地得出未知樣品中的抗原結果。

  在此可以使用直接和間接檢測方法,因此夾心ELISA具有良好的靈敏度和靈活性。

  夾心 ELISA 步驟


  第一步是用特定數(shù)量的捕獲抗體準備表面(例如多孔板)。

  接下來,封閉表面上未結合的蛋白質結合面,以減少背景和非特異性結合。

  之后,將含有目標抗原的樣品添加到板中。應允許靶抗原孵育,以便它可以與固定的捕獲抗體結合。

   洗滌,以除去未結合的抗原。

  接著,添加檢測抗體,同時確保它與捕獲抗體結合到抗原上的不同位置。  

  再次,孵育后,清洗板,以除去連接的未結合的抗體-酶。  

  在此步驟中,添加被酶改變顏色、電化學信號或熒光的底物?,F(xiàn)在測量多板孔上的熒光或電化學信號以確定抗原的存在和數(shù)量。