認(rèn)識(shí)免疫學(xué)試驗(yàn)——酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (ELISA)

  酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）是一種常用于測(cè)量生物樣品中的抗體、抗原、蛋白質(zhì)和糖蛋白的免疫學(xué)測(cè)定。比如：HIV感染的診斷、妊娠試驗(yàn)以及細(xì)胞上清液或血清中細(xì)胞因子或可溶性受體的測(cè)量。ELISA測(cè)定通常在96孔板中進(jìn)行，可以在一次實(shí)驗(yàn)中測(cè)量多個(gè)樣品。這些板需要是特殊的吸收板（例如NUNC免疫板）以確保抗體或抗原粘附在表面上。每種ELISA都測(cè)量一種特定抗原，并且針對(duì)多種抗原的試劑盒廣泛可用。

  圖1所示的ELISA是夾心ELISA，這里使用兩組抗體來(lái)檢測(cè)分泌產(chǎn)物，例如細(xì)胞因子。該方法按所示順序逐步進(jìn)行。

       第一步是用捕獲抗體包被ELISA板，然后從板上洗掉任何多余的未結(jié)合的抗體。捕獲抗體是針對(duì)目標(biāo)抗原產(chǎn)生的抗體。

  第二步添加樣品（例如尿液、血清或細(xì)胞上清液）。樣品中發(fā)現(xiàn)的任何抗原都會(huì)與已經(jīng)包被板的捕獲抗體結(jié)合。樣品通常一式兩份或一式三份添加（以進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析），并以不同的濃度添加，以保證其落在測(cè)定的檢測(cè)水平內(nèi)。再次從板上洗掉多余的樣品。

  第三步添加檢測(cè)抗體。該抗體用酶標(biāo)記，通常是辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶。檢測(cè)抗體與已與板結(jié)合的任何目標(biāo)抗原結(jié)合。最后，將基材添加到板上。ELISA測(cè)定通常使用顯色反應(yīng)，將底物（例如TMB或ABTS）轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物，可以使用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)量。

  確定樣品中的抗原濃度需要使用已知濃度的抗原制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（如圖2所示）。然后可以使用光密度(OD)計(jì)算樣品中抗原的濃度。最后，如學(xué)了解更多ELISA，可以參考《ELISA是什么檢測(cè)方法？帶您深入了解ELISA》