細(xì)胞培養(yǎng)：胎牛血清

  胎牛血清(FBS)是研究和工業(yè)實驗室體外細(xì)胞培養(yǎng)工作流程中不可或缺的細(xì)胞培養(yǎng)基補充劑。含有血清的培養(yǎng)基為重現(xiàn)生理條件的組織來源細(xì)胞的生長創(chuàng)造了一個人工環(huán)境。細(xì)胞培養(yǎng)基提供細(xì)胞生長和功能所必需的能量和營養(yǎng)來源。血清為細(xì)胞提供細(xì)胞增殖、細(xì)胞維持、細(xì)胞粘附到細(xì)胞培養(yǎng)物支持和信號傳導(dǎo)過程支持所需的生長因子、氨基酸、糖和激素。添加血清有助于維持培養(yǎng)基的pH值并防止在操作細(xì)胞時遭受機械損傷。相關(guān)文章《什么是胎牛血清？從基本概念到實際應(yīng)用的全面解析！》

  如何獲取FBS？

  FBS是從適合食用的懷孕母牛的胎兒血液中采集的。血液在無菌條件下采集，冷藏并凝固。離心后，血清與凝結(jié)的血細(xì)胞分離。血液采集僅在有執(zhí)照的設(shè)施中進(jìn)行，并且包括健康狀況得到批準(zhǔn)的動物。相應(yīng)的主管部門會檢查FBS設(shè)施以控制質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。國際動物衛(wèi)生局(OIE)與各國政府合作，致力于控制傳染性動物疾病的傳播。

  一些公司在其產(chǎn)品的可追溯性（動物來源信息和動物健康記錄）方面仍存在問題。確?？勺匪菪苑浅Ｖ匾梢员苊庋迮沃g的不一致以及產(chǎn)品特性的變化。行業(yè)機構(gòu)國際血清工業(yè)協(xié)會(ISIA)成立的目的是促進(jìn)與動物源產(chǎn)品相關(guān)的實踐的可追溯性和合規(guī)性。加入ISIA的公司的設(shè)施都經(jīng)過獨立審計，并遵守國際可追溯性標(biāo)準(zhǔn)，包括收集和審查與加工、運輸或商業(yè)活動有關(guān)的文件。

  不同類型的FBS

  血清可從不同年齡的動物身上提取。FBS取自胎兒，而新生牛血清(NBCS)則取自出生不到20天的新生牛犢。成年牛血清取自12個月以上的牛。血清類型會影響生化成分。血清的選擇取決于細(xì)胞應(yīng)用和細(xì)胞類型。

  FBS和新生牛血清之間最顯著的區(qū)別之一是循環(huán)抗體的水平。NBCS的免疫球蛋白(IgG)水平高于FBS，因為母牛給小牛喂食的第一批飼料或初乳富含抗體。區(qū)分血清來源的另一種方法是檢測γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)水平。GGT是一種存在于血清和不同細(xì)胞類型表面的轉(zhuǎn)移酶，在肝臟中特別活躍(2)。該酶負(fù)責(zé)抗氧化劑谷胱甘肽的代謝。與IgG一樣，GGT也存在于初乳中，在血液中循環(huán)。這導(dǎo)致NBCS的血清GGT水平高于FBS ?？梢允褂毛F醫(yī)篩查來檢測IgG和GGT。

  FBS的不同制備方法

  由于FBS是一種復(fù)雜的生物分子混合物，因此某些應(yīng)用可能需要額外的準(zhǔn)備步驟。FBS含有補體蛋白。對于特定細(xì)胞類型，血清中存在的抗體可以與細(xì)胞結(jié)合，激活補體蛋白并導(dǎo)致細(xì)胞裂解。

  1、熱滅活FBS ——將血清加熱至56°C持續(xù)30分鐘——可滅活補體蛋白。

  2、FBS的另一種制備方法涉及IgG消耗。血清中的IgG可能會妨礙從雜交瘤培養(yǎng)物中純化單克隆抗體。可以利用IgG與ProteinA以高親和力結(jié)合的能力從血清中去除IgG。與ProteinA共價偶聯(lián)的Sepharose柱可用于處理FBS并降低或消耗IgG水平。

  3、另一種FBS治療方法是活性炭剝離。這種治療方法使用活性炭樹脂來降低類固醇激素（雌二醇、孕酮、皮質(zhì)醇）的濃度，這些激素是親脂性的（在脂質(zhì)和脂肪中具有良好的溶解性）。對于受體研究，活性炭/葡聚糖剝離的FBS被證明是有用的，因為它降低了類固醇激素的濃度。

  4、一種FBS物理滅活處理涉及伽馬射線照射。盡管根據(jù)監(jiān)管要求對FBS進(jìn)行了污染物檢測，但仍可能存在極低水平的污染物，從而對細(xì)胞培養(yǎng)造成問題。使用伽馬射線照射（波長較短的電磁輻射）處理FBS可減少病毒和支原體的病原體污染。該處理不會影響血清的質(zhì)量，也不會影響激素、滲透壓、pH值和電泳圖。使用伽馬射線照射的FBS對于生產(chǎn)病毒和疫苗尤為重要。

  5、過濾也可用于處理FBS。使用0.45μm過濾器過濾血清可用于去除因纖維蛋白原存在而產(chǎn)生的絮狀物質(zhì)，因為絮狀物質(zhì)可能會妨礙實驗。對于培養(yǎng)對內(nèi)毒素（脂多糖，LPS）敏感的細(xì)胞，例如巨噬細(xì)胞和免疫細(xì)胞，可能需要低內(nèi)毒素FBS。在FBS中發(fā)現(xiàn)微量內(nèi)毒素（LPS）。然而，超低內(nèi)毒素FBS在無菌條件下經(jīng)過額外過濾，以保證<0.1EU/ml的內(nèi)毒素水平。此外，超濾可以去除細(xì)胞外囊泡（EV）中的污染物以及蛋白質(zhì)和RNA聚集體，這些都是已知的FBS污染形式。EV污染可能會帶來問題。EV耗盡的FBS有利于需要標(biāo)準(zhǔn)化的臨床工作流程或EV研究。

  其他來源的血清

  除牛以外的其他動物的血清也已被證明可用于研究。例如，馬血清對于維持培養(yǎng)的造血祖細(xì)胞并使其保持分化程度較低的狀態(tài)非常重要。其他動物的血清也有用，包括山羊、驢、兔子、羔羊和豬。