ELISA是一種快速、靈敏、準確、可靠的定量分析方法。樣品制備是ELISA實驗成功的關鍵。在開始采集ELISA樣品時，我們可能會遇到一些問題。用于ELISA的常見樣品包括血液（血清、血漿）、組織勻漿、細胞裂解液和細胞培養(yǎng)上清液等。許多因素都會影響ELISA實驗的結果，例如采樣時間、處理、保存等?，F(xiàn)在為大家介紹樣品處理方法，以供參考。
血樣本
血清和血漿是血液處理中常見的兩種樣本類型。它們的主要區(qū)別在于血清在凝固后分離而得，缺乏纖維蛋白原，而血漿則在加入抗凝劑后分離得到。但由于血漿中含有纖維蛋白原，當纖維蛋白原對檢測目標有影響時，建議使用血清。兩者均適用于大多數(shù)ELISA實驗。
血清處理：將血樣品放入血清分離管中，讓其在室溫下凝固兩小時或在4°C下過夜。隨后，以約1,000×g的速度離心20分鐘，將血清分離出來。建議立即使用新鮮制備的血清，或將其分裝并存儲在-20°C或-80°C下以備后用，但要避免反復凍融。
血漿處理：使用EDTA或肝素作為抗凝劑來收集血漿。收集后的血樣品應在30分鐘內在2-8°C下以1,000×g的速度離心15分鐘，將血漿分離出來。同樣，建議立即使用或分裝后存儲在-20°C或-80°C下，但要避免反復冷凍/解凍循環(huán)。
組織勻漿
組織沖洗和稱重：首先，在冰冷的PBS中徹底沖洗組織樣本，以去除多余的血液，并確保維持組織的完整性。在進行均質化之前，請務必稱重組織樣本，以確保后續(xù)步驟中添加適量的裂解液。
組織切碎和加入裂解液：將組織樣本切碎并置于新鮮的裂解液中。根據(jù)目標蛋白的亞細胞位置，選擇適當?shù)牧呀庖?。建議在每單位組織重量中添加特定比例的裂解緩沖液，以確保最佳的裂解效果。
超聲處理：使用超聲波細胞破碎儀對懸浮液進行超聲處理，直到溶液變得清澈透明。確保超聲處理的時間和功率是一致的，以獲得均勻的懸浮液。
離心和保存：將勻漿在適當?shù)碾x心速度下離心，以去除細胞碎片和殘留的細胞核。收集上清液，可立即進行測定，或分裝后存儲在≤-20℃以備后用。請注意，避免反復冷凍/解凍循環(huán)，以保持樣品的穩(wěn)定性和質量。
細胞裂解物
洗滌和分離細胞：貼壁細胞首先使用冷PBS輕輕洗滌，然后使用胰蛋白酶進行分離。對于懸浮細胞，可以直接進行離心收集。
重復洗滌：對細胞進行三次冷PBS清洗，以確保去除殘留的培養(yǎng)基或其他污染物。
裂解：將細胞懸浮于新鮮的裂解緩沖液中，濃度為107個細胞/mL。如果需要，可以對細胞進行超聲波處理，直到溶液變得清澈透明。
離心去除細胞碎片：在2-8℃條件下，以1,500×g的速度離心10分鐘，以去除細胞碎片和其他雜質。
檢測或分裝：收集上清液并立即進行測定，或將樣品分裝存儲在≤-20℃。對于細胞培養(yǎng)上清液，以1,000×g的速度離心樣品20分鐘，收集上清液并立即測定，或將樣品分裝在-20℃或-80℃下備用。避免反復凍融，以確保樣品的穩(wěn)定性和質量。
糞便
樣本采集：取8份100mg（約80-120mg）的糞便樣本。
樣本處理：將每份糞便樣本加入5mlPBS中，并在振蕩器中振蕩40秒，以確保樣品的均勻混合。
均質化：將混合后的樣品在室溫下均質化25-30分鐘，以確保充分裂解和釋放目標分子。
離心：將均質化后的樣品以1mL的量轉移到新的離心管中，并以10,000×g的速度離心20分鐘，以沉淀固體顆粒和雜質。
收集上清液：立即收集離心后的上清液進行測定，或將其等分并儲存在≤-20℃或-80℃，以備后續(xù)使用。務必避免樣品反復冷凍/解凍循環(huán)，以確保樣品質量和穩(wěn)定性。
尿液
樣品采集：將當天的第一次尿液（中流）或者24小時尿液以無菌方式直接收集到無菌容器中。
離心：將尿液樣品以1,000×g的速度離心15分鐘，以沉淀固體顆粒和雜質。
收集上清液：立即收集離心后的上清液進行測定，或將其等分并儲存在-20℃或-80℃，以備后續(xù)使用。務必避免樣品反復冷凍/解凍循環(huán)，以確保樣品質量和穩(wěn)定性。
腦脊液
離心：將腦脊液樣本以1,000×g的速度離心15分鐘，以沉淀固體顆粒和雜質。
收集上清液：立即收集離心后的上清液進行檢測，或將其等分并儲存在-20℃或-80℃，以備后續(xù)使用。務必避免樣品反復冷凍/解凍循環(huán)，以確保樣品質量和穩(wěn)定性。
樣品處理的目的 是為了收集目標分子，這是實驗成功的前提。由于蛋白質一般都容易 變性和 降解，因此處理過程應盡量溫和。樣品的保存也很重要，尤其要注意不要反復凍融，樣品可分裝保存，4℃保存時間不超過一周，-20℃保存時間不超過1個月，-80 ℃保存時間不超過2個月。測定前，將樣品恢復至室溫，嚴禁加熱樣品。
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