免疫測(cè)定試劑盒概述及其工作原理

  40多年來(lái)，免疫測(cè)定法一直應(yīng)用于醫(yī)療保健行業(yè)、實(shí)驗(yàn)室醫(yī)學(xué)和科學(xué)研究，豐富了人類和動(dòng)物的生活。臨床免疫測(cè)定測(cè)試增強(qiáng)了治療選擇，減少了患者住院時(shí)間并減輕了疾病的嚴(yán)重程度。

  在生命科學(xué)領(lǐng)域，免疫測(cè)定通過(guò)監(jiān)測(cè)各種蛋白質(zhì)、激素和抗體在研究生物系統(tǒng)方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。在商業(yè)領(lǐng)域，免疫測(cè)定有多種用途，包括檢測(cè)食品和水中的毒素以及對(duì)制造過(guò)程中使用的特定分子進(jìn)行質(zhì)量控制監(jiān)測(cè)。

  在商業(yè)領(lǐng)域，免疫測(cè)定測(cè)試用于各種目的，包括檢測(cè)食品和水中的毒素以及制造過(guò)程中使用的特定分子的質(zhì)量控制監(jiān)測(cè)。

  本文上海通蔚生物將為大家介紹免疫測(cè)定試劑盒的各個(gè)方面、其工作原理及其用途。

  什么是免疫測(cè)定？

  免疫測(cè)定是一種分子檢測(cè)測(cè)試，由于其速度快、可靠性高，因此既可用于現(xiàn)場(chǎng)，也可用于實(shí)驗(yàn)室。免疫測(cè)定依賴于抗體與分子獨(dú)特結(jié)構(gòu)結(jié)合的天然能力，以確保準(zhǔn)確性。因此，它們對(duì)于定制抗體生產(chǎn)服務(wù)很有價(jià)值。動(dòng)物在檢測(cè)到病原體存在時(shí)就會(huì)產(chǎn)生抗體和蛋白質(zhì)?？贵w可能存在于體液中，包括血液和組織液，它們可以在與抗原接觸時(shí)與抗原結(jié)合。

  抗體之所以特殊，是因?yàn)樗鼈冎慌c目標(biāo)抗原或分析物結(jié)合，這是通過(guò)根據(jù)抗原的三維框架定制定制抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)的。一旦從人體血液中分離出來(lái)，純單克隆和多克隆抗體就可以作為高精度測(cè)試試劑，用于監(jiān)測(cè)目標(biāo)分子，同時(shí)最大限度地減少周圍化合物和化學(xué)物質(zhì)的干擾。

  免疫測(cè)定測(cè)試的工作原理

  抗體可用于免疫測(cè)定測(cè)試，以識(shí)別血液和其他體液中低濃度的生物標(biāo)志物。這種方法使抗原與新引入的特定抗體結(jié)合，產(chǎn)生免疫反應(yīng)。這指的是選擇性；抗體的目標(biāo)范圍很窄，只與目標(biāo)分析物結(jié)合。免疫測(cè)定可以利用抗原和抗體之間的相互作用，用清潔試劑檢測(cè)分析物。當(dāng)目標(biāo)分析物存在時(shí)，就會(huì)發(fā)生顏色變化。所見的顏色代表測(cè)試液中目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)的濃度。

  免疫測(cè)定類型

  1.蛋白質(zhì)印跡法(WB)

  通過(guò)電泳根據(jù)給定生物樣本中的蛋白質(zhì)大小進(jìn)行分離，然后將其轉(zhuǎn)移到膜上并用特定抗體染色。利用該技術(shù)，除了檢測(cè)感興趣的蛋白質(zhì)外，還可以確定其大小、確認(rèn)是否存在翻譯后修飾或比較不同樣本中的濃度等。

  2.免疫沉淀(IP)

  通過(guò)抗原-抗體復(fù)合物的沉淀從樣品中存在的其他成分中分離出某種蛋白質(zhì)。除了檢測(cè)和定量蛋白質(zhì)外，其應(yīng)用非常廣泛，包括確定某種抗原的分子量、研究蛋白質(zhì)之間的相互作用或監(jiān)測(cè)翻譯后修飾。

  3.放射免疫分析（RIA）

  使用放射性同位素標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物。隨后，讀取放射性來(lái)檢測(cè)復(fù)合物并確認(rèn)和量化樣本中目標(biāo)蛋白質(zhì)的存在。放射免疫分析法的優(yōu)點(diǎn)之一是它是一種高靈敏度的技術(shù)，可以檢測(cè)出樣品中濃度極低的蛋白質(zhì)。然而，它也有一個(gè)很大的缺點(diǎn)，那就是使用放射性物質(zhì)存在潛在的危險(xiǎn)。

  4.ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）

  在不同類型的免疫測(cè)定中，ELISA因其易于實(shí)施、多功能性以及高靈敏度和特異性而成為研究實(shí)驗(yàn)室中最流行和最常用的方法之一。它基于酶的使用，通過(guò)添加相應(yīng)的底物催化比色反應(yīng)，可以檢測(cè)抗原-抗體連接（從而檢測(cè)樣品中是否存在某種抗原）。

  5.CLIA(化學(xué)發(fā)光免疫分析)

  化學(xué)發(fā)光測(cè)定或CLIA與ELISA的原理相同，不同之處在于，在這種情況下，抗原-抗體結(jié)合是通過(guò)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的熒光來(lái)測(cè)量的。CLIA檢測(cè)的缺點(diǎn)是需要特定的設(shè)備來(lái)讀取熒光，但另一方面，它們的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度明顯高于傳統(tǒng)的ELISA。

  6.免疫熒光（IF）

  在免疫熒光測(cè)定中，利用熒光團(tuán)可以通過(guò)與特定抗體的結(jié)合來(lái)檢測(cè)目的抗原。

  7.免疫組織化學(xué)(IHC)

  結(jié)合了免疫學(xué)、生物化學(xué)和組織學(xué)技術(shù)，通過(guò)使用特異性抗體來(lái)檢測(cè)組織切片中存在的抗原。此外，它還可以可視化所研究組織內(nèi)抗原的分布和位置。

  8.免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）

  這是一種與免疫組織化學(xué)具有相似基礎(chǔ)的技術(shù)，只是在這種情況下，免疫細(xì)胞化學(xué)可以檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的抗原。IHC和ICC的靈敏度略低于ELISA或WesternBlot，但它們?cè)试S在完整細(xì)胞或組織的背景下研究抗原，而無(wú)需事先將其分離。

  9.流式細(xì)胞術(shù)（FC）

  在各種免疫測(cè)定方法中，流式細(xì)胞術(shù)是最復(fù)雜的方法之一。流式細(xì)胞術(shù)是一種測(cè)量激光光束散射和反射的方法，根據(jù)細(xì)胞的物理化學(xué)特性對(duì)懸浮液中的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和分析。

  免疫測(cè)定有哪些應(yīng)用？

  免疫測(cè)定法因其操作簡(jiǎn)單而廣為使用。以下是免疫測(cè)定法的一些常見應(yīng)用。

  1.臨床診斷和用藥監(jiān)督

  免疫測(cè)定在多種疾病的診斷和治療中發(fā)揮著重要作用。免疫測(cè)定用于癌癥診斷、妊娠檢測(cè)和治療藥物監(jiān)測(cè)，以及定制肽合成等其他應(yīng)用。這些生物分析測(cè)定可以評(píng)估用于治療癌癥和艾滋病毒的處方藥的療效。此外，它們還用于工作場(chǎng)所的藥物檢測(cè)領(lǐng)域。

  2.生物制藥分析

  “生物制藥”是指使用生物過(guò)程或材料衍生、生產(chǎn)或創(chuàng)造的藥物和生物試劑。免疫測(cè)定是生物制藥研究和開發(fā)的有益工具，例如細(xì)胞療法、基因合成和疫苗。

  3.食品分析

  在生產(chǎn)食品和開發(fā)新食譜時(shí)，免疫測(cè)定測(cè)試經(jīng)常用于識(shí)別潛在的有害污染物或過(guò)敏原。例如，免疫測(cè)定測(cè)試可以篩查麩質(zhì)、危險(xiǎn)化合物、重金屬中毒或大腸桿菌等病原體。

  4.食物過(guò)敏原檢測(cè)

  這種檢測(cè)至關(guān)重要，因?yàn)槭澄镆鸬倪^(guò)敏反應(yīng)可能是致命的。有些人的免疫系統(tǒng)對(duì)某些食物中的蛋白質(zhì)反應(yīng)異常，導(dǎo)致一種稱為食物過(guò)敏的疾病。涉及免疫球蛋白的細(xì)胞介導(dǎo)和抗體介導(dǎo)反應(yīng)都會(huì)引起癥狀。牛奶、雞蛋、杏仁、芝麻、小麥和甲殼類動(dòng)物是常見的過(guò)敏食物，可以使用家庭和工作場(chǎng)所提供的眾多免疫測(cè)定試劑盒之一進(jìn)行檢測(cè)。

  從生產(chǎn)設(shè)備中取出的拭子和對(duì)成品食品的測(cè)試可用于確定是否存在交叉污染，并確保企業(yè)遵守法律法規(guī)。食物過(guò)敏者可以提供人類IgE進(jìn)行免疫學(xué)測(cè)試，而多克隆或單克隆動(dòng)物抗血清可以提供動(dòng)物IgG和IgY。雖然單克隆抗體被設(shè)計(jì)成僅識(shí)別一種蛋白質(zhì)或肽，但多克隆抗血清是針對(duì)一組蛋白質(zhì)產(chǎn)生的。

  點(diǎn)免疫印跡法或SDS-PAGE可用于定性鑒定食物過(guò)敏原，而Rocket免疫電泳法和ELISA可用于定量鑒定隱藏的食物過(guò)敏原。點(diǎn)免疫印跡法也是一種定性檢測(cè)食物過(guò)敏原的方法。ELISA用于鑒定完整的蛋白質(zhì)，但某些ELISA無(wú)法檢測(cè)蛋白質(zhì)水解物。由于親脂性殘留物很難定位，因此被稱為免疫測(cè)定ELISA的殘留檢測(cè)方法需要進(jìn)行重大開發(fā)。

  5.霉菌毒素分析

  霉菌毒素是天然存在的毒素，由特定霉菌產(chǎn)生。它們對(duì)人類健康有害，對(duì)消費(fèi)者構(gòu)成威脅。黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮和伏馬毒素等毒素都屬于此類有害物質(zhì)。

  如果儲(chǔ)存不當(dāng)，玉米、小麥、大米、燕麥、黑麥、大豆、堅(jiān)果、水果和香料等農(nóng)產(chǎn)品都可能被霉菌毒素污染。此外，霉菌毒素在收獲和干燥之前可能會(huì)進(jìn)入食品和飼料中?；诿庖邷y(cè)定技術(shù)的霉菌毒素檢測(cè)技術(shù)問世已有十多年。直接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA測(cè)試是檢測(cè)霉菌毒素最流行的免疫測(cè)定程序。

  6.環(huán)境監(jiān)測(cè)

  近年來(lái)，免疫測(cè)定法已進(jìn)入環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域。免疫測(cè)定法有助于檢測(cè)環(huán)境污染物。例如，免疫測(cè)定法可檢測(cè)地下水和地表水中的各種有害物質(zhì)，如PCB（多氯聯(lián)苯）、某些殺蟲劑等。

  免疫測(cè)定測(cè)試有哪些優(yōu)勢(shì)？

  由于其實(shí)用性，抗體免疫測(cè)定已變得很普遍。使用抗體或免疫測(cè)定的方法包括：

  1.經(jīng)濟(jì)

  2.可靠的

  2.足夠靈敏，可以檢測(cè)到微量分子

  4.適用于多種化學(xué)工藝和工業(yè)用途

  免疫測(cè)定可以識(shí)別常規(guī)程序無(wú)法檢測(cè)到的低濃度重要抗原。免疫測(cè)定通?？焖俣_，使臨床醫(yī)生能夠可靠地診斷各種疾病，包括糖尿病、癌癥和心血管疾病。