發(fā)布時間:2024-08-14 發(fā)布作者:上海通蔚生物
免疫測定法根據(jù)檢測方法分類分為酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)、放射免疫分析、熒光免疫分析、熒光免疫分析和蛋白質印跡法等。本篇文章上海通蔚生物給大家具體的說一下它們之間的區(qū)別。
酶聯(lián)免疫吸附實驗
放射免疫分析
基本原理
使用與抗體相關的酶。
檢測基于酶-底物反應的顏色變化或光發(fā)射。
使用放射性同位素標記抗原。
檢測是基于測量抗原抗體復合物發(fā)射的放射性。
檢測機制安全
產(chǎn)生可測量的顏色變化或光發(fā)射。
測量放射性同位素發(fā)射的放射性。
安全
安全、無輻射危害。
無需特殊處理或處置要求。
涉及輻射危害。
需要小心處理、儲存和處置放射性物質。
潛在的輻射危害需要記錄并報告。
實驗室要求
可以在標準實驗室進行。
不需要專門的設施或培訓。
需要專門的實驗室設施來處理放射性物質。
需要專門的區(qū)域和對人員進行專門的培訓。
成本和便利性
一般成本較低。
沒有針對材料儲存或處理的具體安排。
由于使用放射性同位素而導致成本較高。
需要對放射性物質的處理、儲存和處置進行細致的規(guī)劃。
敏感度
靈敏度高,但一般比RIA靈敏度低。
比 ELISA 更靈敏。
監(jiān)管和安全問題
除了標準實驗室安全之外,沒有特定的監(jiān)管問題。
由于使用放射性物質而產(chǎn)生嚴格的監(jiān)管和安全問題。
同位素的半衰期較短,限制了它的應用。
酶聯(lián)免疫吸附實驗
熒光免疫分析
基本原理
使用酶聯(lián)抗體。
檢測基于酶-底物反應的顏色變化或光發(fā)射。
使用附著于抗體的熒光標簽。
檢測基于對抗原抗體復合物發(fā)出的熒光強度的測量。
檢測機制
測量顏色變化或光發(fā)射。
測量熒光強度。
敏感度
靈敏度高,但對于極低濃度,靈敏度一般低于熒光免疫分析法。
靈敏度高,適合檢測低濃度的抗原。
應用
廣泛應用于臨床診斷和研究。
適用于檢測和量化各種生物液體和組織中的抗原。
適用于需要高靈敏度的應用。
常用于測量低抗原濃度的研究。
易于使用
使用微孔板讀數(shù)儀等標準實驗室設備進行設置更加簡單。
需要能夠檢測熒光的設備。
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酶聯(lián)免疫吸附試驗 |
化學發(fā)光免疫分析 |
基本原理 |
使用酶聯(lián)抗體。 檢測基于酶-底物反應的顏色變化或光發(fā)射。 |
使用從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時發(fā)光的分子。 堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶等酶催化與底物(例如魯米諾)的反應,產(chǎn)生光。 |
檢測機制 |
測量顏色變化或光發(fā)射。 |
測量光發(fā)射。 |
敏感性和特異性 |
敏感性和特異性較高,但一般低于CLIA。 |
與 ELISA 相比,靈敏度和特異性更高。 在檢測 SARS-CoV-2 等疾病的抗體時顯示出更高的靈敏度(92.3% 到 97.8% 對比 ELISA 的 75.0% 到 84.3%)。 |
應用 |
用于檢測和定量各種疾病的抗原和抗體,如 SARS-CoV-2、HIV、HCV、HBV、肺炎支原體、丙型肝炎病毒、梅毒螺旋體等。 |
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易于使用 |
提供快速的結果。 需要專門的設備來測量光發(fā)射。 |
使用微孔板讀數(shù)儀等標準實驗室設備進行設置更加簡單。 與 CLIA 相比更耗時。 |
成本效益 |
更具成本效益,適合日常使用。 |
由于需要專門的設備和試劑,因此通常價格更昂貴。 |
檢測范圍 |
測量光密度,其范圍可能更加有限。 |
測量相對光單位,提供更廣泛的檢測范圍。 |
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酶聯(lián)免疫吸附實驗 |
蛋白質印跡法 |
基本原理 |
使用光密度測量抗原抗體反應。 由于其簡單性、速度和適合高通量實驗室而受到青睞。 使用96孔板,所需樣品量較少。 使用標準曲線量化抗原濃度。 |
更加復雜,更加耗時。
需要仔細加載樣品,考慮膜和信號飽和度,并使用內部控制進行標準化。
具有高特異性并能檢測蛋白質的大小和純度。
能夠利用熒光標記抗體進行多重檢測。 |
易于使用 |
操作簡單,適合大規(guī)模測試。 |
復雜且需要更多時間和專業(yè)知識。 涉及電泳、轉移到膜和抗體檢測等多個步驟。 |
敏感性和特異性 |
對檢測和定量抗原具有高靈敏度和良好的特異性。 |
特異性高,能夠確認特定蛋白質的存在和純度。 可以檢測蛋白質的大小,提供有關目標的額外信息。
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應用 |
廣泛應用于臨床診斷和研究。 非常適合高通量篩選和常規(guī)檢測。
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在需要詳細蛋白質分析的研究和臨床環(huán)境中非常有價值。 用于確認特定目標并分析蛋白質的大小和純度。
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檢測和量化 |
依賴于光密度測量。 使用標準曲線進行精確的濃度測定。
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可以實現(xiàn)蛋白質帶的可視化,提供有關蛋白質大小的信息。 可以使用內部控制進行標準化以確保結果的準確性。
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綜合上述,相信你對免疫測定法檢測方法之間區(qū)別有所了解認識,ELISA作為免疫測定法的經(jīng)典代表,因其操作簡便、靈敏度高、成本較低等優(yōu)點而廣泛應用于各個領域。然而,隨著科技的進步,其他免疫測定法不斷涌現(xiàn),各有優(yōu)劣。無論是ELISA還是其他免疫測定方法,選擇合適的檢測方法需要根據(jù)具體的實驗目的、樣本類型、目標物質等因素綜合考慮。未來,隨著技術的發(fā)展,免疫測定法將會更加精準、高效、便捷,為科學研究和疾病診斷提供更加強大的助力。