021-54845833/15800441009品質(zhì)保證 · 通蔚試劑
發(fā)布時間：2024-03-06 發(fā)布作者：上海通蔚生物
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒）(以下簡稱ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒）)：是酶免疫測定技術(shù)中應(yīng)用最廣的技術(shù)。ELISA在實(shí)驗(yàn)過程可檢測血液、尿液或其他體液中的某些抗體、抗原和其他物質(zhì)。不過ELISA在實(shí)驗(yàn)過程要遵循一些使用注意事項(xiàng)。下文將圍繞ELISA檢測試劑盒使用為大家詳細(xì)介紹。
酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)是一種用于檢測樣品中抗原或抗體的免疫學(xué)技術(shù)。ELISA還可用于定量樣品中的抗原、抗體、蛋白質(zhì)、酶或激素。它的組成有如下幾部分構(gòu)成：
1.酶聯(lián)免疫試劑：包括酶結(jié)合物、抗體或抗原等，是ELISA試驗(yàn)中的關(guān)鍵試劑。酶結(jié)合物是指酶與抗體或抗原結(jié)合后的產(chǎn)物，具有催化反應(yīng)的作用；抗體或抗原則是用于特異性結(jié)合待測目標(biāo)分子的物質(zhì)。
2.底物溶液：用于提供反應(yīng)所需底物，使酶催化反應(yīng)得以進(jìn)行。常見的底物溶液包括鄰苯二胺、四甲基聯(lián)苯胺等。
3.洗滌液：用于清洗反應(yīng)板上的非特異性結(jié)合物質(zhì)，提高試驗(yàn)的特異性。洗滌液一般由緩沖液和表面活性劑組成。
4.終止液：用于終止酶促反應(yīng)，使顏色變化不再進(jìn)行。終止液一般含有酸或堿等能夠中和反應(yīng)液酸堿度的物質(zhì)。
5.檢測板：用于承載反應(yīng)液，并提供反應(yīng)場所。檢測板一般由聚苯乙烯等材料制成，上面附有包被抗原或抗體的微孔。
6.酶標(biāo)儀：用于檢測反應(yīng)產(chǎn)物，并定量測定待測目標(biāo)分子的濃度。酶標(biāo)儀具有高靈敏度、高精度和高重復(fù)性的特點(diǎn)。
7.說明書：詳細(xì)介紹了試劑盒的使用方法、注意事項(xiàng)和保存條件等信息，是用戶使用試劑盒的重要參考。
通蔚ELISA試劑盒
1.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒：根據(jù)檢測目的選擇相應(yīng)的試劑盒，確保試劑盒的質(zhì)量和有效期。
2.酶標(biāo)板：用于酶標(biāo)反應(yīng)的板條，一般選用聚苯乙烯材質(zhì)。
3.酶標(biāo)抗體：與待測樣本中的抗原結(jié)合的抗體，通常使用間接法、競爭法或夾心法等檢測方法。
4.底物溶液：用于酶催化底物顯色的溶液。
5.終止液：用于終止酶催化反應(yīng)的溶液。
在ELISA檢測試劑盒使用前，除了了解試劑盒組成，還要對試劑做保存和準(zhǔn)備。這里我們簡單羅列一下試劑保存注意事項(xiàng)。
1、溫度條件：試劑保存條件應(yīng)遵循說明書，我們建議溫度在2-8攝氏度的冰箱中，避免高溫和冷凍。對于某些特定的試劑，可能需要更嚴(yán)格的溫度控制，如-20℃或更低。具體要遵循您的實(shí)驗(yàn)要求和說明書。避免反復(fù)凍融，盡量一次性使用完一瓶試劑。
2、光照：某些試劑對光敏感，這里我們建議對光敏感試劑避光保存或者采用棕色瓶或鋁箔紙包裹試劑瓶。大家在購買試劑盒之前，可以對試劑做些了解。
3、防潮：試劑盒某些試劑對濕度較為敏感，因此，保證試劑干燥非常重要。在存儲試劑可以使用干燥劑和密封袋進(jìn)行防潮。
試劑盒試劑可以貼上標(biāo)簽，便于分類。試劑避免與其他化學(xué)物質(zhì)存放，避免交叉污染。在實(shí)驗(yàn)過程盡量用干凈的、專用的取樣器具。
1.血清或血漿：通常使用血清或血漿作為待測樣本，需在采集后盡快分離并保存。
2.組織勻漿：將組織研磨成勻漿，用于提取組織中的抗原。
3.細(xì)胞培養(yǎng)上清液：用于檢測細(xì)胞分泌的抗原或抗體。
1.酶標(biāo)儀：用于讀取酶標(biāo)板的吸光度值。
2.洗板機(jī)：用于清洗酶標(biāo)板，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3.移液器：用于準(zhǔn)確移取溶液。
4.離心機(jī)：用于血清或血漿的分離。
上述一切準(zhǔn)備就緒，就開始elisa檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)了
1.實(shí)驗(yàn)前仔細(xì)閱讀試劑盒說明書，了解實(shí)驗(yàn)原理、操作步驟及注意事項(xiàng)。
2.確保實(shí)驗(yàn)環(huán)境清潔、干燥，避免外界干擾。
3.實(shí)驗(yàn)前對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，確保儀器處于正常工作狀態(tài)。
4.按照試劑盒說明書配制所需的溶液，并按照實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作。
5.在實(shí)驗(yàn)過程中注意觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，及時記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
6.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后及時清洗儀器和實(shí)驗(yàn)器具，并按照要求處理廢棄物。
7.對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析和解釋，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
ELISA檢測試劑盒有多種不同的檢測方法，今天我們就從直接法ELISA、間接法ELISA、夾心法ELISA、競爭法ELISA四種方法給大家詳細(xì)講解。
將抗原按一定的比例稀釋好包被到固相載體上，然后加入稀釋好的特異性的酶標(biāo)抗體，孵育后加入底物顯色并判讀結(jié)果。
直接ELISA操作很簡單，步驟也比較簡練，但是其應(yīng)用范圍還是非常有限的，一個重要的原因是這種ELISA中只經(jīng)過了一步信號放大（酶的放大），所以其靈敏度不是很高；另外，其測定的對象也非常有限，只能測定酶標(biāo)記的分子。
1、包被抗原：用包被緩沖液稀釋抗原至最適濃度（5～20 ug/ml）各0.3 ml加于微反應(yīng)板每個凹孔中,4℃過夜或37℃水浴2～3小時，貯存冰箱。
2、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。
3、加被檢標(biāo)本：每凹孔加入用含有0.05%吐溫-20的稀釋緩沖液稀釋的被檢血清各0.2 mL，37℃，作用1～2小時。
4、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。
5、加入酶結(jié)合物：每凹孔加入稀釋緩沖液稀釋的酶結(jié)合物0.2 mL37℃作用1～2小時。
6、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。
7、加入0.2 mL底物溶液于每個凹孔（OPD或OT），室溫作用30分鐘（另作一空白對照，0.4 mL底物加0.1 mL終止劑）。
8、加終止劑：每凹孔加2 M H2SO4或2 M檸檬酸0.05 mL。
9、觀察記錄結(jié)果：目測或用酶標(biāo)比色計(jì)測定（OPD用492 nm）OD值。
1、將具有專一性的抗體固著（coating）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體。
2、加入待測檢體，檢體中若含有待測的抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)。
3、洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一的一次抗體，與待測抗原進(jìn)行鍵結(jié)。
4、洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酶的二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)。
5、洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果。
1、包被抗體：用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至最適濃度（1～10 ug/ml），每凹孔加0.3 ml，4℃過夜，或37℃水浴3小時，貯存冰箱。
2、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。
3、分2組，a組加酶標(biāo)記抗原和被檢抗原混合液0.2 ml，b組只加酶標(biāo)記抗原液0.2 ml，37℃作用1～2小時。（混合液可作成不同稀釋度）
4、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。
5、加入0.2 ml底物溶液于每個凹孔（OPD或OT），室溫作用30分鐘（另作一空白對照，0.4 ml底物加0.1 mL終止劑）。
6、加終止劑：每凹孔加2 M H2SO4或2 M檸檬酸0.05 mL。
7、用酶標(biāo)比色計(jì)測定a、b兩組OD值，并求出a、b、OD值的差數(shù)。
上述操作步驟方法大家可以具體的結(jié)合自己的實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行，也可以參考說明書選擇一個合適的使用方法。
ELISA酶底物顯色
在進(jìn)行ELISA數(shù)據(jù)分析時，首先需要對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和統(tǒng)計(jì)。這包括記錄每個樣本的吸光度值，通常使用微板閱讀器進(jìn)行測量。接下來，需要進(jìn)行數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)化處理，以確保不同實(shí)驗(yàn)之間的數(shù)據(jù)可比性。標(biāo)準(zhǔn)化的方法包括對照組的設(shè)定和數(shù)據(jù)的歸一化處理。
一旦完成數(shù)據(jù)的整理和標(biāo)準(zhǔn)化處理，就可以進(jìn)行ELISA數(shù)據(jù)的結(jié)果解讀。通常情況下，ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果以吸光度值或濃度值的形式呈現(xiàn)。研究人員需要將這些數(shù)據(jù)與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和假設(shè)進(jìn)行比較，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。同時，還需要對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以確定實(shí)驗(yàn)結(jié)果的顯著性和可靠性。
在ELISA數(shù)據(jù)分析和結(jié)果解讀中，還需要考慮實(shí)驗(yàn)的潛在誤差和偏差。例如，操作技術(shù)的差異、實(shí)驗(yàn)條件的變化等因素都可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，研究人員需要對實(shí)驗(yàn)過程中可能存在的誤差進(jìn)行全面的考慮，并在數(shù)據(jù)分析和結(jié)果解讀中進(jìn)行相應(yīng)的修正。
ELISA檢測試劑盒使用介紹到這里，在使用ELISA試劑盒過程，要做好詳細(xì)實(shí)驗(yàn)記錄，把實(shí)驗(yàn)遇到問題記錄下來，避免下次實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)同樣問題束手無策?？偟膩碚f，未來幾年，ELISA試劑盒在檢測各種疾病和病癥方面預(yù)計(jì)將變得更加先進(jìn)、準(zhǔn)確和高效。文章內(nèi)容來自實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)和其它論文參考，有不對地方多多指教。
上海通蔚生物科技有限公司自成立以來，一向以“優(yōu)異的產(chǎn)品，優(yōu)惠的報價和交心的服務(wù)”得到廣闊新老客戶的必定和支撐，不斷提高自身的專業(yè)技術(shù)水平和服務(wù)質(zhì)量，為您提供非常好的產(chǎn)品。
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