ELISA 抗體：概述與應(yīng)用

  酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA) 抗體是用于研究蛋白質(zhì)的 ELISA 測(cè)定的關(guān)鍵要素。在繼續(xù)了解抗體作用之前，有必要了解有關(guān) ELISA 測(cè)試的更多信息。

  ELISA 是實(shí)驗(yàn)室最常用的檢測(cè)方法之一，用于檢測(cè)和定量分析可溶性物質(zhì)，例如肽、抗體和激素。它也稱為酶免疫分析 (EIA)。

  ELISA 測(cè)定的工作原理是特異性抗體和抗原相互作用。它包括將抗原固定在固體表面上，然后將其與附著在報(bào)告酶上的抗體復(fù)合。然后，使用不同的檢測(cè)方法，通過與適當(dāng)?shù)牡孜镆黄鸱跤齺頊y(cè)量報(bào)告酶活性。

  然而，如今已經(jīng)開發(fā)出不同類型或形式的 ELISA 檢測(cè)，其中包括：

  1、直接ELISA

  2、間接ELISA

  3、夾心ELISA

  4、競(jìng)爭(zhēng)性ELISA

  但是，它們都遵循相同的基本步驟，包括：

  1、添加捕獲抗體：將吸附的捕獲抗體（與 ELISA 板結(jié)合）和含有特定抗原的樣品添加到孔板中。

  2、清洗步驟：清洗微孔板孔以去除未結(jié)合的物質(zhì)，僅留下要檢測(cè)的抗原。

  3、添加檢測(cè)抗體：酶聯(lián)檢測(cè)抗體與目標(biāo)抗原的不同表位結(jié)合。

  4、清洗步驟：再次清洗微孔板以去除未結(jié)合的抗體。

  5、檢測(cè)：涉及使用合適的檢測(cè)方法（例如化學(xué)發(fā)光、顯色、比色和熒光測(cè)定）對(duì)復(fù)合物進(jìn)行可視化。辣根過氧化物酶 (HRP) 和堿性磷酸酶 (ALP) 是兩種最常用的底物，它們與酶結(jié)合以產(chǎn)生信號(hào)。  

  6、讀板：酶標(biāo)儀檢測(cè)有色反應(yīng)產(chǎn)物并計(jì)算光密度 (OD) 值，從而了解每個(gè)樣本中存在的抗原量。

  ELISA 反應(yīng)的分析之所以成為可能，主要是因?yàn)榭乖涂贵w之間的強(qiáng)力相互作用。并且，本文上海通蔚生物詳細(xì)介紹了 ELISA 抗體、其功能、在 ELISA 方法中的作用以及在工業(yè)中的應(yīng)用。

  ELISA 抗體：它們是什么及其類型？

  ELISA 抗體抗體與特定抗原配對(duì)，有利于研究不同樣品中分子的特定蛋白質(zhì)。

  根據(jù)定義，抗體是為生物體提供針對(duì)細(xì)菌和病毒（稱為抗原）等外來入侵者的免疫力的蛋白質(zhì)?？贵w也稱為免疫球蛋白 (Ig)。

  抗體的四種多肽各有兩條輕鏈和兩條重鏈。在 ELISA 中，抗體根據(jù)是否直接結(jié)合抗原或另一種抗體進(jìn)行分類：

• 一抗：與目標(biāo)抗原特異性結(jié)合的抗體

• 二抗：標(biāo)記的二抗與一抗結(jié)合

  這些抗體也稱為匹配抗體對(duì)。為了減少 ELISA 反應(yīng)過程中的背景噪音并產(chǎn)生有效的結(jié)果，建議使用抗體的稀釋液。

  如今，許多公司提供即用型 ELISA 試劑盒，其中包含合適的試劑，用于檢測(cè)各種分子，如趨化因子、細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子。

  一抗

  一抗直接與固定在孔板表面的特定抗原結(jié)合。

  為了產(chǎn)生一抗，需要一種宿主物種，例如兔子、小鼠、山羊或雞。在生產(chǎn)的第一步中，宿主將針對(duì)抗原進(jìn)行免疫，產(chǎn)生一抗。

  二抗

  二抗與抗體-靶蛋白復(fù)合物結(jié)合。它通常帶有標(biāo)記，有助于檢測(cè)目標(biāo)抗原。具體來說，這種類型的測(cè)定對(duì)于通過信號(hào)放大分析少量存在的特定蛋白質(zhì)的數(shù)量至關(guān)重要。

  通過將一抗注射到另一種宿主中來產(chǎn)生二抗。例如，如果一抗是在小鼠中產(chǎn)生的，則二抗可以在山羊、兔子或雞中產(chǎn)生。

圖：一抗和二抗的表示

  一抗和二抗都可以是單克隆抗體或多克隆抗體。

  單克隆抗體

  單克隆抗體是由單一親本細(xì)胞中產(chǎn)生的相同 B 細(xì)胞克隆產(chǎn)生的同質(zhì)抗體群。它僅與特定抗原的單個(gè)特定表位相互作用。

  圖：?jiǎn)慰寺】贵w的生成。

  多克隆抗體

  多克隆抗體是體內(nèi)不同 B 細(xì)胞克隆產(chǎn)生的異質(zhì)抗體群。它們可以識(shí)別并結(jié)合單一抗原上的多種表位。

  圖：多克隆抗體的生成

  抗體如何與免疫測(cè)定一起使用？

  免疫測(cè)定是生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室中使用的強(qiáng)大技術(shù)，用于研究蛋白質(zhì)、測(cè)量給定樣品中蛋白質(zhì)的含量，并分析蛋白質(zhì)在生物體中的功能和定位。它們的工作原理是特異性抗原-抗體相互作用。

  檢測(cè)抗原抗體相互作用的兩種免疫測(cè)定包括：

• 直接免疫測(cè)定：在該測(cè)定中，酶聯(lián)一抗與靶抗原結(jié)合。這種抗原-抗體相互作用激活信號(hào)分子進(jìn)行檢測(cè)。

• 間接免疫測(cè)定：一抗與靶抗原結(jié)合。然后，酶綴合的二抗與一抗結(jié)合以檢測(cè)相互作用。通常，該反應(yīng)還使用生物素-鏈霉親和素復(fù)合物來放大信號(hào)。

  ELISA 抗體有什么用途？

  ELISA 抗體在免疫學(xué)和生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室中有廣泛用途。下面列出了一些應(yīng)用：

• 一抗可用于檢測(cè)許多疾病的疾病生物標(biāo)志物，例如糖尿病、癌癥、阿爾茨海默病和帕金森病。然而，為了確認(rèn)診斷并識(shí)別假陽(yáng)性，研究人員需要進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。

  此外，一抗還應(yīng)用于多種治療劑的分布、代謝、吸收和排泄。  

• 二抗在一系列工作流程中具有深遠(yuǎn)的用途，包括 ELISA、蛋白質(zhì)印跡、免疫組織化學(xué)、免疫染色和免疫細(xì)胞化學(xué)。